水母毒素的分离提取及溶血活性研究

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1、水母毒素的分离提取及溶血活性研究【摘要】　　目的研究水母毒素的提取及其溶血活性的影响因素。方法通过缓冲溶液浸取、超声波细胞破碎等操作从水母触手的刺丝囊中提取毒素，采用分光光度法对水母毒素的溶血活性进行测定，并研究了温度、浓度和二价金属离子等因素对毒素溶血活性的影响。结果水母毒素的溶血活性对温度敏感，随着浓度的提高而增大，并且依赖于Ca2+，Mg2+等二价金属离子的存在。结论水母毒素具有较强的溶血活性，但不稳定。【关键词】水母毒素；提取；溶血活性　　Abstract:ObjectiveTostudytheextractionandtheaffectingfactorstohaemo

2、lyticactivityofjellyfishvenom.MethodsJellyfishvenomtheoralarmstochickenredbloodcellsetricmethod.Theeffectsoffactorssuchastemperature,concentration,divalentmetalcationsonthehaemolyticactivityolyticactivityperature-sensitive,andimprovedolyticactivity.ConclusionThehaemolyticactivityofjellyfishve

3、nomisrelativelystrong,butitisunstable.　　Key;Extraction;Haemolyticactivity　　生物毒素是生物活性最高、毒性最大的一类化学物质，对探索生命运动过程和发展新药均有重要价值。药物是指对失调的机体呈现有益作用的化学物质。药物的药理活性和毒副作用主要取决于药物分子的化学结构。化学结构与药物效应之间的关系（即构效关系）是药物研究的重要依据。海洋生物毒素所特有的化学结构使其极有可能成为特异的高活性、高药效的先导化合物，以具有确定药理效用的海洋毒素为先导化合物，对先导化合物进行结构或性能的改造，寻求新的疗效更好的药物是当前新

4、药研究的重要方向之一［1,2］。　　水母属于腔肠动物门，是一个重要的海洋浮游生物类群，它种类多、数量大，分布广泛，我省黄海领域就具有丰富的水母资源，主要的水母品种有海蛰、海月水母和多管水母等。对于具有食用价值的海蛰已经于2004年实现了全人工育苗养殖，如江苏连云港市已经在赣榆、宿城、燕尾港等地建立了养殖基地。水母在食用及药用上都具有研究、开发的价值，自古以来水母用于传统中药，有清热解毒、软坚散结、降压、抑菌、抗衰老的功效，可用于治疗高血压病、气管炎、哮喘、胃溃疡、中枢神经系统疾病等，并可作为神经组织的活性物质和组织胺释放剂。水母的触手上分布着腔肠动物所特有的刺丝囊，其中含有大量的

5、毒素成分。毒素蛋白是水母的主要活性成分之一，它是结构新颖独特的肽类毒素，具有多种生物活性，如溶血性、酶活性、神经毒性、皮肤坏死、肌肉毒性、肝脏毒性以及心脏毒性等［3,4］。　　溶血毒素(Hemolysin)是指多由病原微生物所产生的，能导致机体红细胞及其他有核细胞裂解的毒素类物质，它存在于环节动物、节肢动物、软体动物、棘皮动物等动物的血清或体液中，可以单独作为调理因子或通过蛋白水解酶发挥作用，其活性大小通过溶解（水解）脊椎动物的血细胞表示，最终的溶解效应被称作溶血活性。目前溶血毒素研究以微生物为主，无脊椎动物溶血毒素研究报道非常少，有关水母毒素溶血性能的研究报道很少［5］。本实验

6、通过缓冲溶液浸取、超声波细胞破碎等技术从水母触手的刺丝囊中提取水母毒素，采用分光光度法对其溶血活性进行测定，并研究温度、pH值、金属离子等理化因子对其溶血活性的影响。　　1材料与方法　　1.1水母的采集　　水母于200607采集于江苏燕尾港附近海域的人工养殖场，扇形带刺丝囊的触手沿水母口腕人工切除分放在食品级聚乙烯塑料袋中，扎好封口后，立即于-20℃冷冻保存备用。　　1.2水母毒素的提取及浓度测定　　取一定重量的冷冻的水母触手，在冷冻状态下放入浸取剂（0.01mol/L，pH6.0的磷酸缓冲液）中，在保持温度低于4℃的条件下浸泡3h，匀浆10min后，超声波破碎，超声波功率20

7、0in、工作/间隙时间15/30S。破碎后的物料于4℃、13000r/min的条件下高速冷冻离心15min，所得到的上清液即为水母毒素粗品。以牛血清白蛋白(BSA)作标准，在塑料器皿中用Bradford法(1976)测定水母毒素粗品中蛋白质的浓度C(mg/ml)。　　1.3鸡红细胞悬液的制备　　采集新鲜鸡血50ml，2000r/min离心5min，取上层液体，以pH7.4的磷酸盐缓冲溶液（含136.9mmol/LNaCl，2.68mmol/LKCl，10.14mmol/LNa2H