四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的比较研究

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1、四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的比较研究【摘要】目的比较新疆四种野生甘草活性成分对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用，以期筛选出药效最佳的甘草种类。方法采用MTT法检测不同样品对BCAP37细胞的增殖抑制作用，Hoechst33258荧光染色法检测各样品诱导BCAP37细胞凋亡的作用。结果4种甘草的活性成分对人乳腺癌BCAP37细胞具有显著的增殖抑制与诱导凋亡的作用，且存在显著的种间与产地间差异。结论抗癌药效最佳的甘草种类为阿拉尔甘草。【关键词】甘草活性成分人乳腺癌BCAP37细胞　　parativeStudyon

2、theAnti-proliferationandApoptosis-inducingEffectsofActiveponentsfromFourGlycyrrhizaSpeciesonHumanBreastCancerBCAP-37Cell　　Abstract:ObjectiveToselecttheoptimalglycyrrhizaspeciesformedicinalutilizationbyparingtheanti-proliferationandapoptosis-inducingeffectsofactivepo

3、nentsfromfouranbreastcancerBCAP37cell.MethodsTheanti-proliferationeffectsofdifferentsamplesonBCAP37celleasuredbyMTTassay.Thecellapoptoticrateore,therealGlycyrrhizaspeciesforanticancerutilizationisGlycyrrhizaalalensisL.　　KeyanbreastcancerBCAP37Cell甘草是我国十分重要的中药材，素有

4、“十方九草”的美誉。近年来，随着对甘草开发利用的不断深入，甘草被广泛用于药品、食品、保健品、化妆品等领域［1］，甘草的市场需求量剧增。我国是世界上甘草出口大国，其中80％为野生甘草，仅有20％为栽培甘草。我国甘草储量锐减，由建国初期200～250万吨下降到50～70万吨［2］。现存的野生甘草资源已无法满足日益增长的市场需求，因此，人工栽培甘草势在必行，野生优质甘草品种的筛选显得尤为紧迫。甘草的品质高低最终要以其药效来衡量，前人仅以活性成分含量为指标对甘草品质进行的研究是片面的［3～7］。甘草中最重要的两大类活性成分甘草酸类和甘

5、草黄酮类化合物均具有抗炎、抗病毒及抗肿瘤之功效［8,9］，甘草的抗肿瘤活性尤其受到国内外学者的关注。乳腺癌是全球妇女最常见的恶性肿瘤。新近报告，美国女性乳腺癌的发病率已跃升为1/7，而在我国过去10年中，乳腺癌发病率也上升了27%，乳腺癌业已成为威胁妇女生命和健康的头号杀手［10］。因此，本文研究了新疆的胀果甘草GlycyrrhizainflataBatal.，光果甘草G.glabraL.，阿拉尔甘草G.alalensisL.和黄甘草G.eurycarpaL.等4种野生甘草的甘草水提物和甘草总黄酮对人乳腺癌BCAP37细胞的

6、增殖抑制作用，以期筛选出药效最佳的甘草栽培种类，为优质甘草的规模化人工种植奠定基础，为甘草抗癌新药物的研发提供科学依据。　　1器材　　1.1细胞株人乳腺癌BCAP37细胞株由中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库提供。　　1.2实验样品各样品采样地点及样品名称见表1。所有样品经石河子大学李学禹先生鉴定为真品。表1采样地点及样品名称（略）　　1.3试剂与仪器　　1.3.1试剂RPMI1640培养基,Gibco公司；小牛血清,杭州四季青生物工程材料有限公司；HEPES，华美生物工程公司；胰蛋白酶，上海蓝季科技发展有限公司；四噻唑蓝

7、(MTT)、二甲基亚砜(DMSO),Sigma公司；顺铂(DDP)，江苏豪森药业股份有限公司；Hoechst33258染色试剂盒，碧云天生物技术研究所。　　1.3.2仪器CO2培养箱，美国（Forma）；Metertech∑960自动酶标仪；荧光显微镜，OlympusBX51；超净工作台，上海净化设备厂；血球记数板，上海医用光学仪器厂。　　2方法　　2.1实验样品采集与处理采集株龄一致(根茎粗细相等)的4种甘草的根茎材料，立即放入80℃烘箱中烘干至恒重，然后用药材粉碎机将其粉碎成粉末，过100目筛，备用。　　2.2甘草活性成分

8、的制备　　2.2.1甘草水提物准确称取1.0g甘草根茎干粉加10ml蒸馏水于室温下放置48h，12000r/min离心10min，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，加样前用细胞培养液根据　　3结果甘草活性成分对BCAP37细胞的增殖抑制率（％）结果见表2。经Hoechst33