自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床研究

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1、自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床研究作者：段卫，张明辉，柳立平，马文波，郭力红，解从军【摘要】目的探讨自体树突状细胞（dendriticcell,DC)疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床疗效和安全性。方法体外培养扩增DC至第6天，HBsAg致敏形成特异性DC疫苗备用。选择HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者66例，随机分为联合治疗组：30例，给予干扰素α-2b500万单位，肌注，隔日1次，疗程24周，同时联合DC疫苗回输治疗，每回输两次为1个疗程（中间间隔2周），每疗程间隔1个月，共进行3个疗

2、程。干扰素治疗组：36例，单独给予干扰素α-2b500万单位，肌注，隔日1次，疗程24周。两组治疗结束后均随访12周。结果联合治疗组和干扰素治疗组治疗前后的ALT复常率均达50%以上（P>0.05)，差异无显著性。而联合治疗组HBV-DNA抑制率和HBeAg阴转率均高于干扰素治疗组（P<0.05)，有统计学意义。结论自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗HBeAg阳性的慢性乙型肝炎效果优于单独干扰素治疗。【关键词】树突状细胞；疫苗；干扰素a-2b；肝炎病毒；乙型树突状细胞（dendriticcell,D

3、C)是起源于骨髓的专职抗原提呈细胞（antigenpressentingcell,APC)，具有启动T细胞介导的免疫应答功能，最早由StEinman和Cohn首次于1973年发现，因其细胞形态上具有众多树突状突起而得名。目前已发现了许多疾病的发生与转归都与DC有关。随着对DC的体外分离、扩增和培养技术等基础研究的不断成熟，DC疫苗在肿瘤、自身免疫性疾病和慢性肝炎的治疗中引起人们的广泛关注。本研究将自体DC经HBsAg致敏形成的特异性DC疫苗与干扰素联合应用，观察治疗HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者的疗效和安

4、全性。1资料与方法1.1研究对象为我院肝病中心2005年10月～2006年9月，门诊或住院的慢性乙型肝炎患者66例，诊断均符合2000年西安中华医学会传染病与寄生虫病学会及肝病学会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准［1］。其中男45例，女21例；年龄18.5～49.3岁，平均33.2±15.7岁；病程9个月～15年，平均8.6±7.1年。病例纳入标准：（1）血清HBsAg阳性半年以上，且HBeAg阳性，HBcAb阳性；（2）血清HBV-DNA≥1×105copies/ml，血清ALT在正常值上限的2

5、～5倍之间，TBil低于正常值上限的2倍，凝血酶原活动度（PTA）大于60%；（3）依从性好；（4）6个月内未用任何抗病毒药物及免疫调节药物治疗。排除对象：血清抗-HCV、抗-HIV阳性者；自身免疫性疾病者；有明显的心、脑、肾损伤者；甲状腺功能异常者；有血液病、糖尿病、酗酒和吸毒史者；妊娠和哺乳期妇女。1.2研究方法1.2.1主要仪器和试剂CO2培养箱（ThermoForma,美国），倒置显微镜（Olympus，日本）,流式细胞仪（Coulter,美国），全自动酶标仪（Thermo，芬兰）。主要试剂：rhG

6、M-CSF、rhIL-4、RPMI1640培养液、鼠抗人CD4，CD8，均购自河北博海生物工程有限公司。HBsAg购自中国预防医学科学院病毒所。1.2.2DC疫苗体外培养在无菌条件下抽取受试者外周静脉血20ml，肝素抗凝，在百级试验室进行下面操作，生理盐水1：1稀释抗凝血，层加到淋巴细胞分离液2000r/min离心30min，分离出外周血单核细胞并计数，用1640液洗2次，再加入含有体积分数15%人AB型血清的1640完全培养基重悬细胞。以2×106/ml的细胞浓度加入一次性6孔培养板中，于37℃、5%CO

7、2饱和湿度下培养4h，吸弃上清液，再用1640培养液轻洗2次，除去非贴壁细胞，加入含500U/mlrhGM-CSF和500U/mlrhIL-4的完全培养基，隔日换液，培养至第6天再加入终浓度2.5μg/ml的HBsAg，4h后加入终浓度为10ng/ml的TNF，继续在37℃、5%CO2饱和湿度下培养1天，收获DC疫苗；用生理盐水洗涤2次并计数，即刻在受试者腋下部位常规消毒后经皮下注入体内。1.2.3治疗方法将66例入选患者采用随机对照方法分为：联合治疗组：30例，给予干扰素α-2b（安福隆，天津华立达生物工

8、程有限公司）500万单位，肌注，隔日1次，疗程24周，同时联合DC疫苗回输治疗，每回输两次为1个疗程（中间间隔2周），每个疗程间隔1个月，共进行3个疗程。干扰素治疗组：36例，单独给予干扰素α-2b500万单位，肌注，隔日1次，疗程24周。两组治疗结束后均随访12周。1.2.4观察指标分别于治疗前、治疗24周结束时、随访12周时，检测血常规、肝功能、乙肝五项、HBV-DNA定量、肾功能、甲状腺功能、记录与治疗有关