哮喘小鼠骨髓树突状细胞的表型及共刺激分子研究

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1、哮喘小鼠骨髓树突状细胞的表型及共刺激分子研究【摘要】目的探讨哮喘小鼠骨髓来源树突状细胞（DCs）的表型及共刺激分子在哮喘发病中的影响。方法用卵清蛋白建立哮喘模型，利用rmGMCSF和rmIL-4体外诱导骨髓细胞分化为DCs，流式细胞仪检测DCs表面共刺激分子的表达，混合淋巴细胞反应检测DCs刺激同种异体的T淋巴细胞增殖的能力。结果在两种细胞因子的作用下，从骨髓中可以诱导出大量的DCs；且均表达DCs的表面标志(33D1)。哮喘组DCs表达CD86分子的水平高于对照组，而CD40、CD80在两组之间没有差异；哮喘组与对照组DCs均能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的增殖，哮喘组DCs的刺激能

2、力明显强于对照组。结论哮喘组DCs的抗原递呈能力增强，表明DCs在哮喘的发病中可能起着重要作用。【关键词】哮喘；树突状细胞；B7；CD40；混合淋巴细胞反应ThestudyofphenotypesandcostimulatorymoleculesofdendriticcellsinasthmaticmiceedicalUniversity，Jiangsu210029，China【Abstract】ObjectiveThepurposeofthisstudybonemarroa.MethodsMurinemodelofovalbumin(OVA)allergicasthmaarroIL

3、-4andgranulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor.Phenotypeetry，andtheantigenpresentingfunctionixedleukocytereaction.ResultsDCsexpressedDCscharacteristic33D1canbedevelopedfrombonemarroIL-4andrmGMCSF.ThestimulatingeffectoftheDCsontheproliferationofthelymphocytesaticandcontrolgroup，buttheeffec

4、tinasthmaticgrouporeintensivethancontrol.DCsfromasthmaticmiceshoaticandcontrolledgroup.ConclusionThisstudysuggeststheantigenpresentingfunctionofDCsinasthmaticgroupayplayanimportantroleinthepathogenesisofasthma.【Keya;dendriticcells;B7;CD40;mixedleukocytereaction哮喘是一种以嗜酸性细胞(Eos)、T淋巴细胞和肥大细胞浸润、气道破坏

5、及气道高反应(AHR)为特点，并且有多种炎性介质参与作用的慢性气道炎症性疾病。活化的CD4+T细胞（Th2）是主要的效应细胞。越来越多的研究提示共刺激分子B7.1(CD80)与B7.2（CD86）等在免疫反应中起重要作用［1，2］。树突状细胞（dendriticcells，DCs）是功能最强的专职抗原递呈细胞（antigen-presentingcells，APCs），是目前发现的唯一能在体外直接激活初始T细胞的APCs，因此DCs成为研究APCs与T细胞相互作用的桥梁和焦点。本研究旨在探讨哮喘小鼠骨髓树突状细胞表面分子的表达及其对淋巴细胞的刺激作用。1材料与方法1.1动物BALB/C

6、小鼠，4～6周，雄性，购自中国科学院上海实验动物中心。ICR小鼠，6~8周，雄性，购自江苏省实验动物中心。1.2细胞因子与抗体重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）（R＆Dsystem）；FITCantiMouseCD86、FITCantiMouseCD80、FITCantiMouseCD40及AntiMouseDCMarker33D1（eBioscience）；FITCGoatantiRatIgG（H+L）（北京中山生物公司）。1.3主要试剂卵清蛋白（OVA，GradeⅡ）（Sigma）；RPMI1640培养基(含L

7、-谷氨酸，不含NaHCO3)（GIBCO）；胎牛血清(FCS)（Hyclone）；丝裂霉素C（Kaoa）；CellTiter96AQueousOneSolutionCellProliferationAssay(MTS)（Promega）。其他试剂为国产分析纯。1.4方法1.4.1小鼠哮喘模型的建立参照2.3两组DC刺激同种异体T细胞增殖能力的分析结果显示哮喘组DC和对照组DC均能刺激同种异体的T细胞的强烈增殖，且随DC数目的增多而增强；而且哮