真核表达survivin基因对曲古菌素a诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响的论文

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1、真核表达survivin基因对曲古菌素A诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响的论文　　【摘要】目的探讨survivin基因对曲古菌素a(tsa)诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响。方法(1)将本实验室已构建成功的survivin正义全长真核表达质粒(pcdna3.1survivin)，经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞a2780，以转染pcdna3.1空载体的a2780细胞为对照。(2)rtpcr和rna和蛋白质的表达。(3)mtt比色法和流式细胞仪(facs)分别检测tsa对两组细胞存活率和凋亡率的影响。(4)rna和蛋白质表达明显高于空载体组。(2)mtt比色法和facs检测提示转染pcdna3.

2、1survivin组细胞存活率明显高于空载体组,细胞凋亡率明显低于空载体组，差异有统计学意义(p<0.05)。pcdna3.1survivin转染后的a2780细胞对tsa的敏感性明显降低。(3)axiaoli，xinghui，ading　　departmentofobstetricsandgynecology,tongjihospital,tongjimedicalcollege,huazhonguniversityofscienceandtechnology,ading，email：dma@tjh.tjmu.edu.abstract：objectivetoinvest

3、igatetheeffectofsurvivinexpressiononapoptosisofovariancancercellsinducedbytrichostatina(tsa).methods(1)a2780cellsrnaandproteinttassayandfloetry(facs).(4)expressionofsurvivinproteinentbyrnaandproteinintransfectedcellstransfectedttassayandfacs,respectively(p<0.05).thesensitivityofa2780cellstran

4、sfectede.conclusionapoptosisofovariancancercellsinducedbytsamayberelatedtotheexpressionofsurvivingene.　　keys;trichostatina;apoptosis　　卵巢癌在女性生殖器肿瘤中预后最差,极易转移和复发,这与卵巢癌化疗耐药密切相关。.cOmsurvivin基因是一种细胞凋亡抑制基因,位于17q25,是凋亡抑制蛋白家族(inhibitorofapoptosisproteins，iaps)中的一员[1]。它表达于胚胎和胎儿组织及绝大多数肿瘤组织，但在成人终末分化组织(胸腺、生殖

5、器除外)无表达[2]。它参与了恶性肿瘤的发生、发展和凋亡抵抗,使其成为值得关注的抗癌治疗靶基因。曲古菌素a(trichostatina,tsa)是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,通过改变瘤细胞染色体上组蛋白去乙酰化水平,影响多种基因的表达水平,从而诱导细胞周期阻滞和凋亡[3]。本实验将survivin的正义全长真核表达质粒(pcdna3.1survivin)转染人卵巢癌细胞a2780，探讨survivin基因对曲古菌素a(tsa)诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1材料和试剂人卵巢癌细胞株a2780由武汉大学中国典型物种保藏中心提供;小牛血清为杭州四

6、季青生物工程材料有限公司产品;trizol试剂和培养基rpmi1640购自美国gbicobrl公司;曲古菌素a购自sigma公司;survivin兔抗人单克隆抗体购自santacruz公司;四甲基偶氮唑盐(mtt,5mg/ml,pbs配制)购自amresco公司;脂质体lipofectamim2000购自invitrogentm公司;survivin正义全长真核表达质粒(pcdna3.1survivin)为本实验室保存[4];pcr引物由上海博亚生物技术有限公司合成。　　1.1.2主要仪器酶标仪为美国biorad2550型;流式细胞仪(facscanbectondickinson

7、)为美国公司产品;etra,german)为德国公司产品。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人卵巢癌细胞株a2780培养于含10%新鲜小牛血清的rpmi1640培养基中,置于37℃,5%co2,相对湿度90%的培养箱中培养,细胞呈贴壁生长。　　1.2.2转染脂质体lipofectamim2000包裹已构建好的pcdna3.1survivin重组体和pcdna3.1空载体，将a2780细胞以1×106/ml接种6孔板，待其生长至70%～80%