曲古抑菌素对小细胞肺癌细胞系nci-h446的诱导分化及凋亡作用研究

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1、江苏大学硕士学位论文曲古抑菌素对小细胞肺癌细胞系NCI--H446的诱导分化及凋亡作用研究姓名：刘侃申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：崔国兴20120608江苏大学硕士学位论文摘要研究目的：观察人小细胞肺癌(SCLC)NCI-H446细胞的干细胞特性(Stemness)，探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)对NCI—H446细胞的诱导分化及凋亡的作用机制。为进一步应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)或其它细胞诱导分化剂治疗小细胞肺癌提供了理论和实验基础。研究方法：(1)NCI．H446细胞经RPMI1640完全培养基培养传代后，用干细胞标志蛋白巢蛋白(nestin)，

2、CDl33，波形蛋白(vimentin)和CD44的抗体对进行免疫荧光染色，鉴定该细胞的干细胞特性。(2)NCI．H446细胞经TSA诱导培养后，用神经标志蛋白神经丝蛋白200(NF．200)，pIII．Tubulin，微管相关蛋白2(MAP2)和BM88及细胞增殖核抗原ki67的抗体进行免疫荧光染色和免疫印迹测定(WesternBlotting法)，观察NCI．H446细胞向神经细胞分化的成熟程度和细胞增殖指数的变化。(3)用TUNEL染色法计算细胞的凋亡指数并用免疫印迹法测定细胞的凋亡相关蛋白Caspase3，Bax，Bcl．2表达水平的变化，观察TSA对NCI．H446细胞的诱导凋

3、亡作用。研究结果：(1)在小细胞肺癌NCI．H446细胞株中，nestin，CDl33，vimentin和CD44高表达。曲古抑菌素对小细胞肺癌细胞系NCI．H446的诱导分化及凋亡作用研究(2)经TSA诱导后的NCI．H446细胞株，NF一200，[3111．Tubulin，MAP2和BM88高表达。(3)经TSA诱导后的NCI．H446细胞株，Caspase3明显激活，Bax表达水平增高，Bcl．2表达水平降低，细胞的增殖指数明显降低，凋亡指数明显增高。结论：小细胞肺癌NCI．H446细胞株具有干细胞特性，TSA可诱导小细胞肺癌NCI—H446细胞向神经细胞分化成熟，并激活Caspa

4、se3导致细胞凋亡。关键词：人小细胞肺癌；曲古抑菌素；诱导分化；凋亡II江苏大学硕士学位论文Objective：ABSTRACTToexplorethesternnessofsmallcelllungcancerNCI—H446celllineandtheeffectsofhistonedeacetylaseinhibitor(HDACi)，trichostaninA(TSA)，onthedifferentiationandapoptosisofthecancercells．Forfurtherapplicationofhistonedeacetylaseinhibitors(HDACI

5、)orothercelldifferentiationinducertreatmentofsmallcelllungcancerprovidesatheoreticalandexperimentalbasis．Methods：(1)NCI—H446cellswereculturedandproliferatedinRPMI1640mediumcontaining10％FBS，thenidentifiedtheexpressionsofstemcellmarkersonthemincludingnestin，CD133，CD44andvimentinwithimmunofluorescen

6、ce．(2)TheNCI．H446cellsweretreatedwithTSA，thenexpressionsofneuronmarkers，NF一200，[3III—Tubulin，MAP2andBM88，inthecellsweredetectedbyimmunofluorescenceandWesternblotting．TheproliferationcellnuclearantigenKi67immunofluorescence。stainingindex(proliferationindex)wasusedtoeveluatetheeffectofTSAonprolifer

7、ationofNCI-H446cells．(3)TheTUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPnickendlabeling)methodwasappliedtocaculeteapoptoticindexoftheTSA．treatedcellsandexpressionsofapoptosisasociatedproteinsIII曲古抑菌素对小细胞肺癌细胞系NCI．H446的诱