人皮下脂肪来源脂肪干细胞的分离培养及鉴定

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第Aca二dJ军Sec医MiIM学ed学Un报iv2。。7A(8)·813·ug；28·论著·人皮下脂肪来源脂肪干细胞的分离培养及鉴定张迅轶，仵敏娟，刘厚奇(第二军医大学基础部组织胚胎学教研室，发育生物学研究所，上海200433)[摘要]目的：建立从切除得到的人皮下脂肪组织分离及培养脂肪干细胞(ADSC)的方法。方法：以人皮下脂肪组织为材料来源，分离、培养、扩增ADSC，并应用针对相对特异性分子的免疫组化、流式细胞术及多向诱导分化等方法鉴定干细胞特性。结果：本实验培养的ADSC具有干

2、细胞生长特性并表达相对特异分子，有多向分化的潜能，并且具有遗传稳定性。结论：从切取的人皮下脂肪组织可成功分离得到ADSC，为组织工程提供了新的来源丰富、提取方便的种子细胞。[关键词]脂肪组织；间质干细胞；细胞分离；组织工程[中图分类号]R329．21[文献标识码]A[文章编号]0258—879X(2007)08—0813一O4Isolation，cultureandidentificationofadiposederivedstemcellsfromhumansubcutaneousadiposetissuesZHANGXun—y

3、i．wUMin—juan，LIUHou—qi(DepartmentofHistologyandEmbryology，InstituteofDevelopmentalBiology，CollegeofBasicMedicalSciences，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，China)[ABsTRAcT]Objective：Toestablishamethodforisolatingadiposederivedstemcells(ADSCs)fromresectedhum

4、ansubcutaneousadiposetissues．Methods：ADSCswereisolated，cultured，andexpandedfromhumansubcutaneousadiposetissues．Immuno—fluorescentstainingofspecificmolecules，FACSandmulti—lineagedifferentiationinductionwereusedtocharacterizetheobtainedADSCs．Results：ADSCsobtainedinthiss

5、tudyhadthecharacteristicsofstemcellsandexpressedspecificmolecules；theyalsopossessedamulti—lineagedifferentiationpotential，whichwasgeneticallystable．Conclusion：ADSCscanbeisolatedfromhumansubcutaneousadiposetissues，whichprovidesanovelandabundantseedingcellsfortissueengi

6、neering．[KEYWORDS~adiposetissue；mesenchymalstemcells；cellseparation；tissueengineering[AcadJSecMi1MedUniv，2007，28(8)：813-8162脂肪干细胞(adiposederivedstemcell，ADSC)例患者符合上述条件，其中男2例，女5例，年龄是一种存在于脂肪组织中的间充质干细胞，在皮下32～62岁，体质指数(BMI)为22．3～25．1，患子宫肌白色脂肪组织中约占细胞总量的10～20，其具瘤5例，胆囊结石1例，慢性

7、胆囊炎1例。术前均征有一般干细胞的特点，在鉴定、分离、扩增和分化的得患者本人同意，填写知情同意书，于手术时无菌采方法上也与一般成体干细胞类似。Zuk等在抽脂集皮下脂肪组织约5cm。。术组织中成功分离培养ADSC，并诱导分化成脂肪、1．2细胞培养环境、培养液及培养用材料细胞培成软骨、成骨、成神经细胞，最近更有人将其定向诱养于含10胎牛血清的DMEM培养液置于5导成为心肌细胞_2]。然而吸脂术对皮下脂肪有加热CO孵箱，胎牛血清、DMEM、磷酸盐缓冲液(PBS)、液化的操作过程，给细胞的存活和培养带来不利影胰酶、胶原酶I、DMSO等试剂

8、均购自美国Gibco公响。本课题组取得开腹手术时切除、分离得到的皮司，各种培养皿购自美国Falcon公司。细胞培养各下脂肪进行干细胞的提取培养实验，现报告如下。步骤严格无菌操作。1．3ADSC原代培养、传代、冻存及复苏脂肪组织1材料和方法剪成0．3