兔脂肪来源干细胞分离培养及富血小板血浆对其增殖的影响

《兔脂肪来源干细胞分离培养及富血小板血浆对其增殖的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大连医科大学硕士学位论文兔脂肪来源干细胞分离培养及富血小板血浆对其增殖的影响姓名：陈锦申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：胡刚201106兔脂肪来源干细胞分离培养及富血小板’血浆对其增殖的影响硕士生姓名：指导教师：专旨导，j、组：专业名称：陈锦胡刚教授秦宏智教授李芳教授外科学摘要背景：自体脂肪移植已有上百年的历史，因其来源丰富、取材容易、操作简单、充盈外形好、无排异反应等优点，倍受整形美容外科医生的重视，但同时也存在不足之处，其中最主要是移植后脂肪细胞的成活率较低(<60％)。如何提高脂肪细胞的

2、增殖及分化能力，是提高移植成活率的重要环节。随着脂肪组织工程的发展及研究，寻求来源广、易获取、损伤小、稳定扩增的种子细胞和无免疫反应、高效、廉价、配比协同作用好的生长因子是关键问题。目的：分离培养兔脂肪来源干细胞(adipose—derivedstemcells，ADSCs)，并观察ADSCs体外生长的生物学特性及增殖分化潜能，探讨自体富血小板血浆(platelet—richplasma，PRP)对ADSCs增殖的影响。方法：1．实验采用新西兰大白兔，取兔颈背部区脂肪垫，贴壁法及I型胶原酶消化法体外

3、培养兔ADSCs，观察其形态特征。2．取第3代ADSCs进行成脂、成骨诱导分化，两周后油红O成脂染色及三周后茜素红成骨染色鉴定。3．抽取兔心脏血，采用二次离心法制备PRP，并行全血及PRP血小板计数。4．将第3代细胞分为对照组(细胞180ul+单纯DMEM培养基20u1)、全血组(细胞180ul+全血血浆20u1)和PRP组(细胞180ul+PRP20u1)，采用CCK-8法(CellCountingKit-8)检测不同作用时间(24h、48h、72h)各组对ADSCs增殖活动的影响。结果：1．原代

4、培养的细胞24h后见少量椭圆形细胞贴壁，大部分未贴壁细胞为圆形的红细胞及筋膜杂质。48h首次换液，除去未贴壁的红细胞及筋膜杂质，见小部分贴壁细胞呈短梭形，其间也可见三角形、多角形细胞。3d后见部分细胞已贴壁伸展，呈长梭形，可见核分裂相，梭形细胞逐渐增多。7d后见细胞80％一90％融合，细胞呈漩涡样生长，大小不一，细胞多为长梭形成纤维细胞样。传代细胞4—6h即可贴壁，细胞形态与原代相似，细胞生长速度较原代细胞明显增快。2．细胞成脂诱导两周后油红0染色呈阳性，对照组为阴性；细胞成骨诱导三周后茜素红染色呈

5、阳性，对照组为阴性。3．全血血小板计数为(313．O±137．5)X109／L，PRP血小板计数为(1267．0--+760．2)X10VL，PRP血小板计数是全血的4．08倍。4．CCK-8法显示PRP组在24h、48h、72h时较对照组增殖明显(P

6、s具有多向分化潜能，在特定条件下能够向成骨细胞、脂肪细胞方向诱导分化，可作为组织工程的种子细胞。3．通过二次离心成功提取兔PRP，血小板计数后，PRP的血小板计数控制在全血的4倍以上，二次离心法是制备PRP的有效方法。4．自体PRP对体外培养的兔ADSCs增殖有明显的促进作用。关键词：脂肪间充质干细胞富血小板血浆细胞培养细胞增殖2Isolationandcultivationofrabbitadipose·-derivedstemcellsandtheinfluenceofplatelet--ric

7、hplasmaonthecellproliferationMasterdegreecandidate：ChenJinSupervisor：ProfessorHuGangVice—supervisor：ProfessorQinHongzhiProfessorLiFangMajor：SurgeryAbstractBackground：Autologousfattransplantationhasbeenappliedforhundredsofyears，andhighlyconcernedbycosme

8、ticandplasticsurgeonsfortheadvantagesofthistechnique，suchasrichsourcesoffatcells，easytogetthematerial，simpleoperation，goodfillingshapeandwithoutgraftrejection，etc．Whilethedefinitiveevidenceoffatsurvivalisstillinquestion(Thesurvivalratei