抗猪圆环病毒药物体外筛选研究

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1、河北农业大学硕士学位论文抗猪圆环病毒药物体外筛选研究姓名：王克宁申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：刘聚祥201205摘要猪圆环病毒感染是由猪圆环病毒引起的一种传染病，猪圆环病毒感染疾病遍及世界各个养猪国家和地区，已然成为严重危害养猪业的重要传染病。虽然有报道猪圆环病毒疫苗研制成功，但是由于上市的时间不长，在临床上使用还不广泛，而且疫苗的效果也有待观察，因此在临床上猪圆环病毒病主要采取药物治疗，但临床用药混乱，疗效不确切，迫切需要筛选高效防治药物。本研究对临床上常用的抗病毒药物金刚烷胺、利巴韦林、盐酸阿比朵尔、黄连、金银花、连翘、板蓝根对猪圆环

2、病毒的活性抑制作用进行了检测，以期筛选出高效药物，为临床防治该病提供选药依据。MTT染色法能定量检测细胞的增殖活性，来间接反应药物的抗病毒效果。为此我们将MTT作为细胞培养物中病毒增殖情况的指示系统。本研究利用PK．15细胞建立抗猪圆环病毒药物的筛选模型，设立正常细胞对照组。96孔板培养细胞24h，细胞长成单层细胞后，每孔加入猪圆环病毒液，继续培养6h。在无毒性浓度范围内加入不同浓度药物，继续培养24h，加入MTT培养4h，小心吸取上清液弃去，加入二甲基亚砜，37。C下孵育30min，用酶标仪在490nnl下测定OD值，根据公式计算病毒的抑制率和药物的

3、TI。中药提取物抗猪圆环病毒活性结果：黄连的IC50为363．2gg／mL，治疗指数TI为13．8，金银花的IC50为719．7gg／mL，治疗指数TI为4．1，连翘的IC50为1596．7gg／mL，治疗指数TI为4．6，板蓝根的IC50为1189．4I，tg／mL，治疗指数TI为5．0，筛选出了高效的抗病毒中药药物黄连。化学药物抗猪圆环病毒活性的结果：利巴韦林的IC50为5．53gg／mL，治疗指数TI为33．8，金刚烷胺的IC50为1．19pg／mL，治疗指数TI为124．9，盐酸阿比朵尔的IC50为6．85gg／mL，治疗指数TI为33．1，筛

4、选出了高效抗病毒药物金刚烷胺。试验结果表明，实验药物对猪圆环病毒均具有抑制作用，中药的抗病毒活性总体上要低于西药；中药中，黄连的抗病毒活性最高；西药中，金刚烷胺的抗病毒活性最高。关键词：猪圆环病毒；PK-15细胞；MTr；筛选；药物StudyonTheScreeningoftheDrugsagainstPorcineJ_●●■‘L：lrCOVlrUSlnvltr0MasterCandidate：WANGKeningSpecialty：BasicVeterinarySciencesAdvisors：ProfessorLIUJuxiangAbstractP

5、orcinecircovirus(PCV)resultsinporcinedermatitisandnephropathysyndrome(PDNS)，postweaningmultisystemicwastingsyndrome(PMWS)，pigletcongenitaltremor(PT)andotherseriousdiseases．ThePCVinfectionhasextendedallovertheworldwhichhasbeenconsideredasallimportantpathogen．ItisreportedthatPCRva

6、ccinehasbeenprepared．Becauseofashortlifetime，commercialvaccinesareshortofclinicalapplicationandevaluation．Therefore，themajorclinicaltreatmentforCPVisusingantivirusmedicine．Nowadays，therearesortsofanfivirusmedicinesforclinicalapplication，butefficientmedicineisrequiredpressing．Int

7、hisstudy,somenormalantivirusmedicinesweredetectedtoscreenactivemedicineantiPCV．Inthisstudy,PK-15cellstemwasusedasthemodelforscreening．TheblankcontrolandPCV-infectedgroupwereset．MTTassayisabletoquantitydetectalivecellstoindirectlyevaluationtheeffectofantivimsmedicines．111ecellswe

8、reseededinto96-wellplateandcultured．PCVwasadded