尿脱落细胞6号染色体长臂的微卫星改变诊断膀胱肿瘤

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1、尿脱落细胞6号染色体长臂的微卫星改变诊断膀胱肿瘤作者：成凡，耄雍烈，贺大林，杨林，陈萍，杨娥【关键词】膀胱肿瘤【Abstract】AIM:Toinvestigatethemicrosatel1itealteration(MA)atchromosome6qintheearlydiagnosisofbladdertumorandtostudywhetherthelossofheterozygosity(LOH)at6qisrelatedtothedevelopmentofbladdertumor・METHODS:D6S404andD6434microsatellitemarkersnear6q21

2、weretestedbyPCRSSLPstainmethodinboththeurinesedimentDNAandtumorDNAfrom31casesofbladdertumor・RESULTS:Amongthe31casesofbladdertumor,64.5%ofthetumortissueDNAand581%oftheurinesedimentsDNAshowedMA,whilethelOnonbladdertumorcaseshadnochangesateitherofthetwoloci・Theresultwasnotassociatedwiththegradeorstageo

3、fthetumor・LOHwasdetectedintumortissuesonsiteforD6S404(355%)andD6S434(226%).CONCLUSION:MicrosatelliteanalysisofurinesedimentsisofsignificanceintheearlydiagnosisofbladdertumorandtheremaybesometumorsuppressorgenerelevanttothedevelopmentofbladderLumornear6q21・Keywordsbladderneoplasms;urinesedimentjmicro

4、satellitealteration;chromosome6q【摘要】冃的：探讨尿脱落细胞6q的微卫星改变(MA)在膀胱肿瘤早期诊断屮的应用价值，并研究6q的杂合性缺失(LOH)与膀胱肿瘤的关系•方法：应用6q21区域附近D6S404,D6S434微卫星标志，以PCRSSLP银染法对31例膀胱肿瘤的尿脱落细胞与肿瘤组织进行微卫星分析•结果：645%的肿瘤组织和581%的尿脱落细胞发生MA；10例非膀胱肿瘤对照未出现MA；检岀率与肿瘤分期，分级无相关性；肿瘤组织D6S404L0H发生率355%,D6S434L0H发生率226%.结论：尿脱落细胞微卫星分析有早期诊断意义；6q21区域附近可能存在

5、与膀胱肿瘤相关的肿瘤抑制基因.【关键词】膀胱肿瘤；尿脱落细胞；微卫星改变；6号染体长臂0引言膀胱肿瘤是常见恶性肿瘤[1],尿脱落细胞中有95%为肿瘤细胞,微卫星改变(microsatellitealteration,MA)是肿瘤的常见现象,包扌舌微卫星不稳定性(microsatelliteinstab订ity,MSI)和杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH).对膀胱肿瘤MA进行研究发现，其MA常见于9号染色体,显示与肿瘤的发生关系密切•在其他肿瘤研究中注意到，6号染色体长臂(6q)MA与肿瘤的关系甚为重要，发现了一些抑癌基因•膀胱肿瘤细胞6q±MA的研究，国外刚刚起步，

6、国内尚无研究报道，值得深入研究.1材料和方法1.1材料膀胱肿瘤患者31例，取肿瘤标本,术前膀胱冲洗液及外周血・G1,G2,G3级肿瘤分别为17,8,6例；PTa,PT1,PT2,PT3分别为2,20,4,5例.同时收集10例非膀胱肿瘤患者的血，尿作为对照・DNA提取纯化试剂盒购自上海Sangon生物工程技术有限公司（Tabl）.表1微卫星引物序列及定位（略）TablPrimersequencesformicrosatelliteloci（略）1.2方法基因组DNA的制备参照DNA提取纯化试剂盒说明•选择染色体6q21区域附近D6S404,D6S434两个微卫星位点，引物序列通过NCBI数据库获

7、得，由上海Sangon生物工程技术有限公司合成.PCR扩增反应体系50uL,DNA模板30~50ng.反应参数为：94°C预变性4min；94°C50s,58°C50s,72°C60s,共30个循环；72°C充分终延伸5min.PCR扩增产物用20g・L-l琼脂糖凝胶电泳检测•变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显示带型，制作干胶片•将血，尿及肿瘤组织DNA的PCR产物同时比较，以血为正常对