丙二醛含量测定方法.ppt

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1、植物组织或器官中丙二醛含量的测定一、实验目的1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。2.了解丙二醛积累对细胞的伤害二、实验原理：硫代巴比妥酸TBA丙二醛3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川）逆境膜脂的过氧化作用丙二醛酸性棕红色(最大吸收峰在532nm)三、实验材料：受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：实验仪器：紫外可见分光光度计离心机四、实验步骤：1MDA的提取称2g叶片，加入10％三氯乙酸(TCA)2ml及少量石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA充分研

2、磨，接着把匀浆液以4000r／min离心10min，其上清液即为MDA提取液。2MDA显色反应及测定取2mlMDA提取液（对照组取2ml蒸馏水），在加2ml0.6％TBA混匀，在试管上加棉塞，置沸水中加热15min，迅速拿出水浴锅冷却，以4000r／min离心15min，于波长532nm和450nm下测定OD值。五、结果计算以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，分别计算衰老和对照组的值。MDA浓度(μmol/L)=6.45OD532-0.56OD450D450、D532分别代表450nm、532nm波长

3、下的光密度值。六、注意事项：0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降；如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为0.5nmol·L-1）可溶性糖与TBA显色反应的产物在532nm也有吸收（最大吸收在450nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可

4、溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。