头孢菌素C高产低耗发酵菌株的选育.pdf

《头孢菌素C高产低耗发酵菌株的选育.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、技术管理头孢菌素C高产低耗发酵菌株的选育袁晓明李素荣（石药庄石药集团中诺药业（石家庄）有限公司）摘要：本文通过建立头孢菌素快速显色测定方法和生产菌株菌种选育诱变剂、融合剂：15W紫光灯、1%氯化锂、30%的聚的适宜的诱变方法，建立了头孢菌素C菌株选育的高通量方法，乙二醇从而选育出低溶氧同时又使用废菌丝的高产低耗发酵菌株。菌种保护剂：20%的甘油关键词：效价测定；菌种选育；诱变；高产低耗实验设备：诱变箱、SPY-50上海摇床、高压液相近年来，随着社会对环境的重视，作为排放危险废弃物（废菌2.实验方法丝）的行业，越来越受到制约，同时，市场竞争也愈演愈烈，使各

2、大（1）原生质体制备厂家不得不尽量降低生产成本。我们建立快速测定发酵液中头取培养至节孢子成熟期的茄子瓶斜面，加无菌水10mL，取其孢菌素C的方法，初步确定筛选高产低耗菌株的最佳方法，为头中1mL接种于500mL的三角瓶中，温度25℃、湿度50%、摇床转孢发酵生产实际提高检测速度和菌株筛选方法的优化提供新的速110r/转，培养至对数生长期（36小时左右）使用纤维素酶。蜗思路。牛酶处理。一、快速测定头孢菌素C的方法（2）紫外诱变、氯化锂处理头孢菌素C的检测方法有多种：碘量法、260nm萦外分光法、制备顶头孢霉菌的原生质体,使原生质体的含量为106-107生物

3、测定法、高压液相法等。在这些方法中都较慢，难以快速的个/mL，照射距离为15cm。取照射过的原生质体悬液进行梯度处理较大数量的样品。因此，不能直接的用于高通量方法中的检稀释、涂布梯度平板、恒温培养，同时以未经处理的孢子液作为测。我们通过多次试验，对碘量法进行改良，使其能够快速的检对照。同样方法，进行1%氯化锂处理。测显色，用于通量菌种选育。（3）低溶氧菌株的筛选1.碘量法的原理选择形态丰满、色泽及大小适中的菌落，分别编号，制作冷冻完整的头孢菌素分子不能与碘起作用，若用碱将头孢菌素分管，保存于-80℃冰箱中。同时，按配方配制种子瓶，按常规方法子的内酰胺环破

4、坏而生成青霉噻唑酸，就能与碘起作用，加入一进行接种、培养。配制发酵培养基，将摇床转速调整由280r/min定量的碘，其中一部分碘与头孢菌素噻唑酸起作用，剩余的碘则调整为120r/min震荡培养，以筛选出低溶氧菌株。用硫代硫酸钠滴定，从头孢菌素的消耗碘量，便可算出效价。碘（4）废菌丝水利用菌株的筛选与青霉噻唑酸在一定条件下（pH4.4-4.5，温度25℃）一分子头选择形态丰满、色泽及大小适中的菌落，分别编号，制作冷冻孢菌素破坏成的青霉噻唑酸，能与8个碘原子起作用。管，保存于-80℃冰箱中。同时，按配方配制种子瓶，按常规方法2.实验试剂和仪器进行接种、培养。

5、配制发酵培养基，用发酵液过滤末端的菌丝水试剂：硫代硫酸钠（0.01077mol/L）、盐酸（1mol/L）、氢氧化（超滤膜过滤）替代发酵培养基中的玉米浆、花生饼粉、谷朊粉等钠（1mol/L）、碘液（0.005mol/L）、醋酸钠缓冲液（pH=4.4～物质，以筛选出低菌丝水回收利用菌株。4.5）、可溶性淀粉(0.5％)（5）融合及低溶氧、菌丝水回收利用菌株的筛选仪器：碘量瓶（100mL）、容量瓶（100mL、150mL、200mL、将所得几株低溶氧条件下(转速由280r/min调整为120r/250mL）、取样枪（0.01mL、0.1mL、1mL）、自制加

6、碘装置（20mLmin)的高单位菌株、废菌丝水替代菌株及出发菌株在30℃温控酸式滴定管25mL碱式滴定管25mL下，用30%PEG处理，涂平板、恒温培养。从中筛选即低溶氧又回3.实验方法收利用废菌丝水的菌株。精密称取定量头孢类抗生素产品，采用不同的稀释倍数，液小结相色谱仪进行定量检测，计算头孢类抗生素发酵单位或效价，记1.由于快速显色检测效价方法的建立，使得菌种选育速度得录结果。用已知效价的稀释液，采用间接碘量法进行测定，用硫到很大的提高，摇床处理摇瓶最多100个，而处理离心管可达代硫酸钠（Na2S2O3）标准液进行滴定，记录已知效价的稀释液消5000支

7、以上。使用高压液相测定菌株培养液效价，每支样品需要耗碘液量。建立限量检测方法，用淀粉做指示剂。6分钟，而使用改良的碘量法显色测定40支的培养液效价（使用我们吸取定量的稀释液，加入一定量的碘液，加入3-4滴淀排枪取用样品），一共需要30分钟即可。粉指示剂，如果显色，效价低于已知效价，如果不显色，效价等于2.筛选出低消耗、回收利用废菌丝水的菌株。通过以上实验或大于已知效价得到低溶氧且回收利用菌丝水的菌丝DJ-228，其相对于出发菌二、高产低耗菌株的优选工株RR9，在发酵单位及质量指标持平的情况下，溶氧消耗（电能节1.实验材料和设备约）降低50%以上，过滤岗位

8、以2-3倍冲水比情况下的末端菌丝菌种：顶头孢霉菌(Cephalosporiuma