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1、洛伐他汀高产菌株的选育摘要：为了提高红曲霉发酵生产洛伐他汀的能力，分别采用紫外线、亚硝酸、硫酸二乙酯对出发菌株(Monascussp.)进行诱变处理。结果表明：3种诱变剂对Monascussp.的诱变效果有较大差异，其中紫外线诱变效果最好，硫酸二乙酯次之，亚硝酸最差。通过筛选，得到2株高产突变株，分别命名为：Monascussp.UV・5、Monascussp.DE-&其产量分别为0.239mg/mL、0.223mg/mL,比原始菌株分别提高了42.3%、32.7%o遗传稳定试验结果显示，Monascussp.UV・5、Monascussp.DE-
2、8遗传性能较稳定，可应用于生产。关键词：洛伐他汀；红曲霉；诱变；紫外线；硫酸二乙酯；亚硝酸中图分类号S511文献标识码A文章编号1007-7731(2017)12-0027-03Abatract：InordertoimprovelovstatinyieldofMonascussp.,thestartingstrainsweretreatedbytreatedbyUV,HNO2andDESrespectively.TheresultsshowedthatthreekindsofMutagenshaddifferenteffectsonMonascus
3、sp.,UVhadbestmutagenesiseffects,thenwasDESandHNO2wastheworst.TwohighandstableyieldmutantswereobtainedandnamedMonascussp.UV-5andMonascussp.DE-8respectively.ThelovstatinyieldofMonascussp.UV-5,Monascussp.DE-8was0.239mg/mLand0.223mg/mL,whichincreased42.3%and32.7%comparedwiththeori
4、ginalstrain.TheconsecutivecultureofMonascussp.UV-5,Monascussp.DE-8showedthatgeneticperformancewasstableandcanbeusedinproduction.Keywords：Lovstatin；Monascussp.；Mutagenesis；UV；DES；Nitrousacid近年来，随着经济的高速发展，人民生活水平不断提高。我国民众的饮食结构发生了很大的改变，过多地摄入高热量、咼脂质的食物,导致高血脂、高血压、冠心病等“富贵病”发病率显著增加。目前
5、，临床上治疗该类疾病的主要是他汀类药物，最重要的是洛伐他汀。洛伐他汀(Lovastatin)是一类在临床上应用广泛的降血脂、降胆固醇药物，作为体内疑甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)的结构类似物，能竞争性抑制HMG・CoA的代谢，减少机体内胆固醇的生成，从而对高血压和冠心病等疾病起到积极的防治作用口・4］。当前,洛伐他汀主要是通过微生物发酵生产，在微生物发酵中，优良的菌种是获得生产成功的关键［5］。诱变育种是获得高产菌株的简便有效的手段在微生物育种中被广泛应用。课题组采用多种诱变剂对洛伐他汀产生菌株红曲霉进行处理，以期获得稳定高产菌株，为进一步开发功
6、能性红曲提供理论依据。1材料与方法1.1材料与仪器1.1.1菌株红曲霉（Monascussp.）,粗糙脉胞菌（Neurosporacrassa）,均购于中科院微生物所，保藏于本院院生物制药国家级实训基地。1.1.2培养基斜面培养基及平板培养基：马铃薯蔗糖固体（PDA）培养基；发酵培养基：马铃薯蔗糖液体（PD）培养基。1.1.3洛伐他汀标准品纯度298%,购于上海永叶生物科技有限公司。1.1.4主要仪器设备HJ,磁力搅拌器（江苏医疗）；CBV-1500A超净工作台（上海瑞仰）；QYC.2102摇床（上海福玛）；HPS-250生化培养箱（哈尔滨东明）；
7、高效液相色谱仪（美国戴安）。1.2实验方法1.2.1紫外线（UV）诱变在超净工作台上，用接种环取红曲霉砲子2环，用无菌水制成鞄子悬液，将抱子悬液分成6份（各5mL）,放在紫外诱变装置中分别处理Os、30s、60s>90s、120s、150so然后取诱变处理后的孑包子悬液0.1mL分别涂布于6个固体平板上，倒置培养3d,计算致死率[6]o再分别取0.5mL诱变后的苞子液进行管碟法试验，以抑菌圈直径为指标，初筛突变株。突变效果好的进行摇瓶发酵试验，以洛伐他汀产量为指标进行复筛，并评价诱变效果。1.2.2亚硝酸（HN02）诱变抱子悬液制备方法同1.2.1
8、,将抱子悬液分成6份（各5mL）,分别加入0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25mol/LNaNO2溶液1mL,
