己烯雌酚检测技术概述

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1、己烯雌酚免疫检测技术摘要：：己烯雌酚是一种人工合成的雌性激素，因其残留对人体和环境有明显的危害，对相关产品中己烯雌酚残留的检测受到世界各国共同关注。本文对国内外己烯雌酚的免疫检测方法(酶联免疫法、放射免疫法、荧光免疫分析等)及免疫检测中的关键问题进行了阐述。关键词：己烯雌酚；免疫学；免疫检测像臭名昭著的沙利度胺（反应停）一样，己烯雌酚刚一问世就受到大量的欢迎。己烯雌酚(DES)是一种人工合成的雌性激素，其效用明显，价格便宜。在人们认识到己烯雌酚在生物体中强残留并对生物体具有明显的破坏作用之前的几十里，它曾被广泛地应用于临床治疗上。欧盟、美国、中国等国家从2

2、0世纪7O年代开始关注和重视己烯雌酚的残留及危害问题。然而，由于强大经济利益的驱使，滥用己烯雌酚的现象依然存在。过去20多年时间里，人们发展了许多物理的、化学的方法用以检测DES在动物源性食品中的残留，本文仅就其中的免疫检测方法进行论述。1DES是一种致癌物质，会对人体健康产生严重危害，甚至可诱发人体产生癌变。DES能够在动物源性食品如：肝脏、肌肉、蛋、奶中残留，并通过食物链引发动物和人的癌变，引起少儿的发育早熟以及男性女性化。己烯雌酚对人类和环境的危害是显而易见的，由于使用DES带来的经济利益显著，因此违法滥用DES的现象仍然存在。因此发展针对DES残留

3、的简便、快速、灵敏检测方法是非常必要的，是有效遏制滥用DES的重要技术手段和维护法规制度的必要保障。2免疫检测的方法主要有放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(EIA)、荧光免疫分析(FIA)等。由于其特异性强、灵敏度高、方便快捷、低成本，现在人们悦来越重视免疫检测法。2．1放射免疫法(RIA)放射免疫法是利用同位素标记的与未标记的抗原同抗体发生竞争性抑制反应的放射性同位素体外微量分析方法。RIA灵敏度很高，特异性强，缺点是需要有同位素防护设备，仪器价格昂贵，测定程序比较繁琐和费时。RIA被广泛地用于动物肌肉、肝脏、尿液、牛奶中DES残留检测及DES在动物组织

4、中代谢规律的研究上。己烯雌酚残留免疫检测的主要限制因素是抗体的特异性较差，因此分析前的抽提和纯化步骤是必要的，可以在一定程度上减少假阳性。RIA与其他技术联用，如HPLC．RIA，Celite．RIA可以有效地去除样品中杂质对DES检测的干扰、富集待测DES、提高检测灵敏度。2．2酶联免疫法(EIA)酶联免疫法是继RIA后发展起来的一种非同位素免疫检测技术，灵敏度高，操作安全，不需要昂贵的仪器，可以满足大批量快速测定的需求。GoldsteinJ用ELISA测定动物组织、细胞、亚细胞中DES含量，检测灵敏度是10ng／mL，与同时用RIA测定的结果相近。2．

5、3荧光免疫分析(FIA)FIA用荧光素标记抗原或抗体。TRF~(a,ITQ分辨荧光免疫分析)法被认为是现有免疫方法中灵敏度最高的非均相免疫分析方法。Elliott等¨0运用TRFIA测定牛胆汁中己烯雌酚的量，以镧系元素Eu和作标记物，用时间分辨技术测量荧光，同时加入增强液增强荧光，测定己烯雌酚的ID50为40pg／mL。2．4放射性受体测定法(RRA)1978年Charm在RIA技术的基础上发展了RRA，它类似于RIA，但不同的是，RIA法是通过抗体与DES结合，而RRA是通过受体与DES结合。Arts等¨J用RRA法测定小牛尿液中DES，检测限可达0．6

6、ns／mL，他们给小牛注射50mgDES，然后用RRA法测定尿液，发现在用DES处理后第9d仍然可以在尿液中检测出DES的存在，与同时用酶联免疫检测的结果近似。3己烯雌酚残留检测的现状关于DES免疫检测，德国在这方面技术比较成熟，20世纪70年代就成功制备了DES的抗体，后来又研发了相应的检测试剂盒，检测限小于0．1as／mE，完全能够满足欧盟对DES允许的最大残留量MRL(2vg／kg)的要求(欧盟96／22／EC以及96／23／EC指令)。国内外许多关于DES的研究都是在德国制备的抗体或试剂盒基础上展开的。近年来，我国一些研究人员开始对己烯雌酚免疫测定

7、方法作了初步的一些工作，但仍需做进一步的改善和深入研究为了保证我国人民身体健康，有效地遏制滥用DES的违法行为，满足我国对DES残留检测的要求，加强我国DES检测技术的发展是必要的，尤其需要大力发展DES的免疫检测。参考文献[1]RudigerHW，HaenischF，MetzlerM，eta／．MetabolitesofDiethylstilbestrolinducesisterchromatidexchangeinhumanculturedfiloblasts[J]．Nature，1979，281：392．394．[2]RumseyTS，OltjenR

8、R，DanielsFL，eta／．Depletionpat—ter