MMFSCNG畜禽肉中己烯雌酚的测定方法.docx

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1、MM_FS_CNG_02畜禽肉己烯雌酚高效液相色谱法MM_FS_CNG_0266畜禽肉中己烯雌酚的测定方法1.适用范围本方法适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留量测定。最小检出限（取样5g时，最小检出浓度／kg）。2原理概要样品匀浆后，经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。于波长230nm处测定吸光度同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比较定量。3主要试剂和仪器.主要试剂甲醇；/L磷酸二氢钠（NaHPQ•2HO取1g磷酸二氢钠溶于水成500mL磷酸；己烯雌酚（DES标准溶液：精密称取100mg已烯雌酚（DES溶于甲醇，移入1

2、00mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含，贮于冰箱中；己烯雌酚（DES标准使用液：吸取DES贮备液，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES10Qgo.仪器高效液相色谱仪：具紫外检测器；小型绞肉机；小型粉碎机；电动振荡机；离心机。4.过程简述.提取及净化称取5g（±）绞碎（小于5mm肉样品，放入50mL具塞离心管中，加甲醇，充分搅拌，振荡20min，于3000r/min离心10min，将上清液移出，残渣中再加甲醇，混均后振荡20min，于3000r/min离心10min，合并上清液，此时出现混浊，需再离心10min，取上清液过卩mFH滤膜，备用。.色谱条件紫外检测器检测

3、波长230nm；灵敏度：；流动相：甲醇：/L磷酸二氢钠；70/30,用磷酸调pH=5（其中NaHPQ・2H2Q水溶液需过卩m滤膜）;流速：1mL/min；进样量：20卩L;色谱柱：CLC-QDS-C1&5卩n）x150mn不锈钢柱；柱温：室温。.工作曲线绘制称取5份（每份）绞碎的肉样品，放入50mL具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液（，，，卩g/mL各，同时做空白。其中甲醇总量为，使其测定浓度为，，，，卩g/mL，按处理方法提取备用。.测定分别取样20卩L,注入HPLC柱中，可测得不同浓度DES标准溶液峰高，以DES浓度对峰高绘制工作曲线，同时取样液20卩L，注入HPLC柱中，测得的峰高从

4、工作曲线图中查相应含量，Rt=。AX1000x=5.结果计算.计算V2式中：X样品中己烯雌酚含量，mg/kg；A——进样体积中己烯雌酚含量，ng；m样品的质量，g；V2—进样体积，卩L;Vi——样品甲醇提取液总体积，mL