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时间:2018-07-06
《马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的实验研究 》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的实验研究刘建国,喻国华,廖燕,曾怡春【摘要】 目的观察马齿苋合剂水提液对单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的抑制作用。方法马齿苋水提液作用于Hep-2、Vero细胞和原代兔肾(PRK)3种细胞上研究其抗病毒作用。结果马齿苋合剂水提液在Hep-2、Vero细胞和PRK细胞上均有明显的抗HSV-2作用,对HSV-2的最小有效浓度(MTC)为0.5mg/ml,而且毒性低,最大无毒浓度(TDO)为12mg/ml,治疗指数(TI)为30.0,并有直接杀灭HSV-2的作用。结论马齿苋合剂水提液具有抗HSV-
2、2作用。【关键词】马齿苋合剂水提液单纯疱疹病毒2型 Abstract:ObjectiveTostudytheinhibitiveeffectofPurslanemistureisturePurslanemisturepossesseddistinctanti-HSV-2effect.TheMTCg/ml,TDOg/ml,andTIistureistureplexvirus2(HSV-2);Experimentalstudy HSV-2是一种常见的传染性病原体,可引起生殖道疱疹、病毒性脑炎等多种疾病,而且是宫颈癌的协同诱因。马
3、齿苋Portulaca'oleraceaL.又名马齿草(《雷公炮炙论》),马苋(《本草经集注》),长命菜(《中国药用植物图鉴》),为马齿苋科植物马齿苋的全草,生于田野路边及庭院废墟等向阳处,分布于全国大部分地区。国内对马齿苋的研究〔1〕多集中于马齿苋的化学成分和抗菌作用的研究,但有关马齿苋合剂水提液的抗病毒实验研究很少。本文对马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的药效进行了实验研究。现报道如下。 1材料 1.1细胞 Hep-2、非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)和原代兔肾细胞(PRK)3种细胞引自江西省卫生防疫站,均用Eagle
4、培养基传代培养。PRK取自10d内的乳兔,常规方法制备细胞,用5%乳蛋白水解物培养。 1.2病毒 HSV-2333株由南昌大学医学院病毒研究所提供,Vero细胞于RPMI-1640基础培养液中加入10%的新生牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素,置5%CO2孵箱中37℃培养,3d传代1次。滴度为TCID50=105,实验用103TCID50/ml。 1.3药物 马齿苋(购于江西中医药高等专科学院附属医院中药房)40g,配合黄芪60g,放入500ml三角烧瓶,加入双蒸水200ml浸泡过液,经水连续提取3次,
5、合并3次提取液共400ml,56℃水浴浓缩至100ml,抽滤除菌,分装小瓶放-20℃冰箱保存备用。无环鸟苷滴眼液(ACV)(湖北潜江制药股份有限公司生产,批号H19993456),用Hank's稀释成不同浓度,放置冰箱保存备用。 2方法 2.1细胞毒性实验 将已长满单层的Hep-2细胞、Vero细胞和PRK去生长液,换成含2%小牛血清的MEM维持液,每瓶细胞分别加入不同浓度的马齿苋合剂水提液(0.5~12mg/m1)0.1ml,每一浓度的药物均重复4瓶,并设未加药物的细胞做正常对照。置37℃培养箱中培养l44h,每天观察细
6、胞的变化情况,并记录结果。 2.2病毒感染性滴度的测定 将不同稀释度的HSV-2接种细胞,每管0.1ml,每个稀释度4瓶,37℃吸附1h,弃上清液,加2%小牛血清的MEM培养液1ml,置37℃培养,每日检查病毒生长情况,观察特征性细胞病毒(CPE),7d后记录结果。CPE记录方法:“-”为无CPE;“±”为可疑;“+”为25%的细胞出现CPE;“++”为50%的细胞出现CPE;“+++”为75%的细胞出现CPE;“++++”为100%的细胞出现CPE。 2.3药物体外对病毒增殖的抑制作用 将病毒接种于已长满单层的细胞瓶上
7、,每瓶接种103TCID50/mlHSV-2病毒液0.1ml,37℃吸附1h,弃上清液后,Hank's液洗3次,每一瓶加入含不同浓度的药物0.1ml,加维持液0.9ml,每个浓度药物均重复4瓶,并设置未加药物的病毒对照和细胞对照。然后置37℃培养箱中培养。每日观察CPE,当病毒对照达到“++++”时,判定结果,使病变减少两个“+”为有效。 2.4药物对病毒的直接杀伤作用 将不同浓度的药物与103TCID50/ml病毒液等量混合后于37℃培养12,24,48和96h后,将混合液分别接种长满单层的瓶内,每一浓度的药物均重复接种4
8、瓶,每瓶接种0.2ml,放37℃吸附1h,用Hank's液洗3次,加维持液1ml,置37℃培养箱中培养。同时做细胞对照、阴性对照、病毒对照,放37℃培养12,24,48h和96h后观察并记录结果。 2.5药物对病毒感染的阻断作用 将不同浓度的药物加入细胞瓶内
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