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1、槲皮素对人类乳腺癌细胞增殖的影响论文.freelol/L)能显著促进MCF-7细胞的增殖,而抑制ER阴性MDA-MB231细胞,并将MCF-7细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且Que促进MCF-7细胞增殖作用被ER拮抗剂所拮抗。结论Que具有雌激素活性,此作用是通过ER介导的。【关键词】植物雌激素槲皮素雌激素受体细胞增殖MCF-7MDA-MB231Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofquercetinontheproliferationofmammaryc
2、ancercellinvitro.MethodsEffectsofquercetinonthecellproliferationeasurement.Andtoevaluatetheestrogen-likeeffectofquercetinanditsrelationinedbyfloetry.ResultQuercetin(10～50μmol/L)stimulatedproliferationofER-positiveMCF-7cellparedpulsedfromG1toS,DNAsynthesizingICI182,780.Con
3、clusionQuercetinhastheestrogen-likeactivitiesthroughtheestrogenresponsepatha公司产品。DMEM(高糖)、无酚红DMEM、活性炭-葡聚糖苷处理的胎牛血清(CDT-FBS)为Hyclone公司产品；胰蛋白酶为Gibco公司产品。1.3主要仪器CO2培养箱(Binder制造)；酶联免疫检测仪(EQUENLX-800)；倒置显微镜(Olympus)。2实验方法2.1细胞培养MCF-7、MDA-MB231细胞采用开放式单层贴壁培养,培养液为DMEM(含10%胎牛血清),培养
4、条件为37℃、5%CO2。试验开始前4d将细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含5%CDT-FBS)中培养以耗尽细胞内储存的雌激素。2.2分组将各Que试物用DMSO溶解后,以培养液稀释成所需浓度。溶剂对照组(DMSO组)：体积含量比为0.1%；雌激素对照组(E2组)：0.001μmol/L；Que组：1、10、20、30、40、50μmol/L。2.3MTT细胞增殖试验MCF-7、MDA-MB231细胞经无酚红DMEM(含5%CDT-FBS)培养4d后,选取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,0.01μmol/LPBS(pH7
5、.4)洗2次,加入无血清DMEM,以每孔2×103个的浓度接种于96孔板内,每孔培养液总体积为200μL。培养24h待细胞贴壁后,换为含阳性药物(E2)及4种受试物的DMEM培养液继续培养,每种受试物设4个复孔。分别于24、48、72h时,每孔加入5mg/mLMTT20μL,继续孵育4h,小心吸去培养液,每孔加入DMSO200μL,震荡5～10min,使结晶物完全溶解。以DMSO调零,用酶联免疫检测仪在570nm下测定各孔光吸收值,计算平均A值和增殖率(PR)。PR＝(实验组A值/溶剂对照组A值)×100%2.4雌激素受体完全拮抗实验为验
6、证受试物促MCF-7细胞的增殖是否通过ER发生作用,取经无酚红DMEM(含5%CDT-FBS)培养4d后的MCF-7细胞,以每孔2×103个接种于96孔板。培养24h待细胞贴壁后,换为含阳性药物(E2)及不同浓度药物的无酚红DMEM培养液,各孔同时分别加入终浓度为10-8mol/L的雌激素受体完全拮抗剂ICI182、7804,每种受试物设4个复孔。于24h加入MTT,孵育4h后吸去培养液,以DMSO溶解,在570nm下测定各孔光吸收值,计算平均A值和增殖率。2.5细胞周期测定取经无酚红DMEM(含5%CDT-FBS)培养4d的MCF-7细
7、胞,以5×105个/瓶的密度接种于96孔板中,以无血清DMEM接种24h待细胞贴壁后,换为含阳性药物及不同浓度药物的DMEM培养液继续培养,每种受试物设3个复孔。48h后终止培养,收获细胞用70%冷乙醇4℃固定过夜,RNase处理,PI染色,2h内用流式细胞仪检测细胞周期分布,并计算细胞增殖指数(PI)。PI＝(S＋G2M)/(G0/G1＋S＋G2M)×100%2.6统计学方法实验数据用x±s表示,采用SPSS11.0统计软件进行方差分析(one-echanismofactioninvitroJ.CancerLett,1998,130：1
8、43.3赵丕文,王大伟,王玲巧,等.用小鼠子宫增重法筛选淫羊藿等十味中药雌激素样作用的实验研究J.北京中医药大学学报,2006,29(10)：686.4SibongaJD,DobnigH,Ha
