薏苡仁酯对胃癌bgc823细胞侵袭迁移能力的影响及其机制

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1、薏苡仁酯对胃癌BGC823细胞侵袭迁移能力的影响及其机制【关键词】薏苡仁酯；胃癌；侵袭；迁移；黏附；CD44；CD133　　EffectsofcoixenolideoninvasionandmetastasiscapacityofgastriccarcinomaBGC823cellsinvitroanditsmechanism　　［Abstract］Objective:Toinvestigatetheeffectofcoixenolideonadhesion,invasionandmetastasisofgastriccarcinomaBGC823cellsinvitroandi

2、tsmechanism.Methods:MTTassayinetheeffectofcoixenolideonproliferationofBGC823cells.MatrigeladhesionassayandTransberedtodeterminetheadhesion,invasionandmigratorycapacityofthecells.RTPCRRNAinBGC823cells.Results:CoixenolidecouldinhibittheproliferationofBGC823cellsedependenteffects.Coixenolidesi

3、gnificantlyinhibitedadhesion,invasionandmigratorycapacityofBGC823cellsinvitro.Aftercoixenolidetreatmentfor24h,theexpressionlevelofCD44andCD133mRNAigration,invasionandadhesioncapacityofBGC823cellsinvitro.Theinhibitioneffectmayberelatedtodoetastasis；adhesion；CD44；CD133　　薏苡仁酯注射液是一种从传统中药薏苡仁中提取的抗肿瘤

4、新药,研究［1］证实，它对多种肿瘤细胞有抑制增殖、促进凋亡、抑制肿瘤血管生成等作用。目前有研究［2-3］提示,肿瘤干细胞表面标记物CD44、CD133与胃癌侵袭、转移等恶性生物学行为可能有密切相关。薏苡仁酯对CD44、CD133的影响尚未见报道。本研究旨在观察薏苡仁酯对胃癌细胞株BGC823黏附、侵袭、迁移等生物学行为及CD44、CD133表达的影响。　　1材料与方法　　1材料　　1.1.1细胞株及培养液　　胃癌细胞株BGC823由中国科学院上海细胞生物学研究所引进,1640培养基购自GIBCO公司,胎牛血清购自杭州四季青公司。　　1.1.2主要药品及试剂　　薏苡仁酯注射液由浙江康

5、莱特药业有限公司提供,四氮唑蓝、二甲基亚砜均为Sigma公司产品,Trans孔径),Trizol为美国Invitrogen公司产品,逆转录试剂盒为美国Promiga公司产品,Taq酶为日本Takara公司产品,引物合成由上海生工生物公司提供。PCR扩增仪型号为Eppendorf7501S,凝胶成像仪为北京天能公司产品。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养　　人胃癌细胞株BGC823以含10%胎牛血清的RPMI1640在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养,每天换液1次,0.25%胰酶消化传代。　　1.2.2MTT法检测薏苡仁酯对BGC823细胞增殖的影响　　将对数生长期细胞稀

6、释为5×104ml-1的密度,每孔200μl接种于96孔细胞培养板。薏苡仁酯组的终浓度均依次为5、10、15μl·ml-1,同时设立阴性对照组。分别培养24、48和72h后检测MTT值，实验终止4h前加入四氮唑蓝溶液20μl。弃去上清液,每孔加入DMSO150μl,在振荡器上振荡10min后用酶标仪检验A490nm值。抑制率=(平均对照组A490nm-平均药物组A490nm)/平均对照组A490nm×100%。实验重复3遍。利用IC50计算器计算出IC50。　　1.2.3细胞黏附试验　　分别收集经5μl·ml-1薏苡仁酯作用24h及对照组的细胞悬液,调配浓度为1×105L-1,96孔培

7、养板覆以10μgmatrigel,每孔加悬液0.2ml。培养30、60、90、120min后弃去未黏附细胞。PBS液轻洗2遍后剩余贴壁细胞为黏附细胞计数。按时间点随机取3孔求平均值,计算不同时间的细胞黏附率,计算公式:细胞黏附率=黏附细胞数/总细胞数×100%。　　1.2.4Trans的聚碳酸多孔滤膜分为上下两室,在滤膜上铺以500μgmatrigel,于37℃下重建基底膜,风干1h后备用。将薏苡仁酯组及对照组细胞分别用含0.1%胎牛血清的16