羟基喜树碱诱导大鼠肾脏移植免疫耐受机制的探讨论文

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1、羟基喜树碱诱导大鼠肾脏移植免疫耐受机制的探讨论文沈瑞雄，邵国兴，王禾，石炳毅，王强【关键词】细胞活素类【Abstract】AIM：Toinduceimmunetoleranceinrecipientratsofallogenickidneytransplantationptothecin(HCPT)andcyclosporinA(CsA)andtostudythemechanismofthetolerance.METHODS:TheinbredDAratsg)and5outof10ingroupE(HCPT+CsA)survive

2、dlongerthan150daysevenimmunosuppression(HCPTandCsA)RNAexpressionRNARNAexpressioninthegraftsilartothatinthespleen.CONCLUSION:HighdosageofHCPTorloemunetoleranceinducedbyhydrocamptothecin.ThelevelofcytokinemRNAexpressioninthegraftsissimilartothatinthespleenofrecipients.【

3、Keyptothecin;immunetolerance;cytokines;transplantation;rats【摘要】目的：以羟基喜树碱（HCPT）和环孢素A（CsA）诱导异基因大鼠肾脏移植免疫耐受，并探讨免疫耐受的形成机制.方法:以近交系DA大鼠为供者，近交系LeRNA表达情况.结果:各组移植后存活时间显著长于对照组.C组（HCPT2mg-1kgd-1）中4/10和E组（HCPT10mgkg-1d-1+CsA10mgkg-1d-1）中5/10受者大鼠形成特异性免疫耐受.耐受组IL4.freelRNA表达明显高于排斥组，而

4、IL2，IFNγ明显低于排斥组.受者脾内细胞因子表达量近似于移植物内.结论:大剂量HCPT或小剂量HCPT与CsA合用可诱导异基因大鼠肾脏移植免疫耐受.细胞因子偏向Th2亚类是免疫耐受形成机制之一.受者脾内细胞因子mRNA表达与移植物内表达近似.【关键词】喜树碱;免疫耐受;细胞活素类;移植；大鼠0引言随着免疫抑制治疗的进展，临床器官移植取得很大进步，但目前应用的免疫抑制是以牺牲机体整体免疫功能为代价［１］，且有毒副作用，寻找新型的免疫抑制剂和诱导受者对供者抗原的特异性耐受是当前移植学急需解决的两大问题.前期研究证实羟基喜树碱（Hy

5、drocamptothecin,HCPT）独用或HCPT与环孢霉素A（CyclosporinA,CsA）合用可明显延长大鼠异基因心脏［２］、肾脏移植存活时间，并可使部分受者形成特异性免疫耐受.为进一步探讨免疫耐受形成机制，了解细胞因子在其中的作用，我们应用RTPCR技术检测移植物内及受者脾细胞内mRNA表达情况.1材料和方法1.1材料供体为42只雄性DA大鼠8～10ega公司产品.所用引物由上海生工合成.1．2方法1．2．1动物分组A组（对照组）:移植后不接受任何治疗；B组:HCPT10mgkg-1，ip，1次d-1；C组:HCP

6、T20mgkg-1，ip，1次d-1；D组:CsA10mgkg-1，ig，1次d-1;E组:HCPT10mgkg-1，ip，1次d-1，加CsA10mgkg-1，ig，1次d-1.1．2．2肾脏移植采用改进的Kamada［3］方法，利用显微外科技术行原位左侧肾脏移植法，供体肾静脉与受体肾静脉行端端吻合、供体肾动脉（带有部分腹主动脉壁）与受体腹主动脉行端侧吻合，供体输尿管连同部分膀胱壁与受体膀胱行双层吻合.术中用冰屑保持供肾处于低温状态，移植肾缺血时间约60min.移植后切除右肾.1．2．3皮肤移植9只移植后存活超过130d的Le×

7、15cm的全厚皮片，DA大鼠皮肤移植于受者左季肋部，SHR大鼠皮肤移植于受者右季肋部.1．2．4移植物及受者脾脏细胞因子mRNA检测对9只形成特异性免疫耐受的LeLL-1中2min.无菌取移植肾及脾脏，液氮速冻后保存于-80℃冰箱中待检测.A组中6只大鼠在死亡后立即留取标本.总RNA提取按照GIBROBRL公司提供的RNA提取试剂盒（TRIZOLReagent）的说明进行.RNA的逆转录（cDNA的合成）按照Promega公司逆转录试剂盒的说明进行.PCR扩增cDNA特异性引物序列及退火温度见Tab1，在25μL反应体系中进行，包

8、括250μmolL-1每种dNTP，10μmolL-1引物，25U10×PCR缓冲液，05UTaqDNA聚合酶.94℃变性1min，72℃延伸1min，循环35周期.用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物含05μgmL-1EB的15gL-1琼脂糖凝胶，电泳