原位大鼠肾脏移植模型技术的改进论文

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1、原位大鼠肾脏移植模型技术的改进论文【摘要】目的：为提高大鼠肾移植模型中供体肾脏的利用率，对供肾切取、大鼠输尿管吻合方法进行改进，建立从同一供体切取双侧肾脏分别进行原位肾脏移植的方法。方法：分别切取供体的左、右侧肾脏，经肾脏动脉进行灌注；供肾的肾动脉、静脉分别与受体左侧的肾脏动、静脉血管端端吻合，并应用暂时性内支架辅助的方法进行供肾输尿管与受体输尿管上段直接吻合，同时切除受体右侧肾脏。比较左、右侧供肾受体成活率及术后并发症，并通过病理切片评价移植物的组织学变化。结果：从30个供体大鼠切取52只肾脏，分

2、别施行左、右侧供肾肾脏移植28、24例。与常规单侧供肾相比节约大鼠42%。左侧供肾组5d动物存活率89.3%(25/28).freelg·(100g)-1，肌肉注射麻醉，术中注意保温。1.3外科技术从供体切取双侧肾脏，放入4℃肾脏保存液。左侧肾脏植入第1个受体，原位端端缝合肾脏动、静脉，供肾输尿管与受体输尿管上端间断缝合6针。右侧肾脏翻转180°后植入第2个受体左侧肾窝，与受体的动脉、静脉、输尿管端端吻合。1.3.1供体手术取十字切口进腹，湿盐水纱布包裹肠管。仔细分离供体右侧和左侧肾脏的动、静脉血管

3、，分别结扎肾上腺动静脉，并使肾脏的动、静脉血管骨骼化，利多卡因注射液滴于表面防止动脉痉挛。游离肾脏和输尿管，输尿管在肾脏下极处离断，保留输尿管周围的脂肪组织。在切取肾脏之前15min，通过尾静脉注射肝素100U和甲磺酸酚妥拉明注射液（1mg·kg-1）［5］。在根部结扎左肾动静脉并离断，提起肾动脉外膜，插入4号灌注针进行灌注，灌注液为4℃肾脏离体灌注保存液约2ml（上海长征医院改良HCA）［6］。同法切取灌注右侧肾脏，在根部离断右肾动脉，带部分腔静脉壁剪取右肾静脉，保留右输尿管约2cm。两侧肾脏分别

4、放入4℃HCA肾脏灌注保存液中备用。切取植入过程如图1示。1.3.2受体准备剑突下正中切口进腹，湿盐水纱布包裹肠管牵向右侧。仔细分离受体左侧肾脏的动、静脉，分别结扎肾上腺动静脉。游离肾脏，在靠近腹主动脉、腔静脉处用显微血管夹阻断左侧肾脏的动、静脉血管，尽量靠近肾门处离断左侧肾脏的动、静脉血管和输尿管。冰肝素盐水冲洗动、静脉管腔。1.3.3左侧肾脏原位移植（图2）左侧供肾置于受体的左侧后腹壁肾窝，冰盐水纱布垫起并覆盖，间断滴注冰盐水保持低温，先吻合动脉，直径一般0.5到0.8mm，牵开外膜修齐动脉的末

5、端。端端吻合动脉8～9针，两定点缝合，采用连续缝合间断打结的方法，一般前壁3针后壁3针。静脉的直径1～1.5mm，壁薄而娇嫩。180°两定点固定，端端连续缝合，开放血流后再收紧打结防止形成狭窄。先开放静脉再开放动脉。输尿管的吻合：吻合口靠近受体输尿管上端，一般需要6针间断缝合，2针对端全层牵引线，前后壁分别2针或1针。通过输尿管的蠕动波、尿液通过吻合口来判断是否漏尿。1.3.4右侧肾脏移植（图3）右侧供肾围绕其长轴旋转180°，其凸起的腹侧面靠近左侧肾窝后腹壁。因翻转后原右侧肾静脉靠近背侧，一般先吻

6、合静脉再吻合动脉，方法同左侧供肾。右侧供肾的冷缺血时间120min。肾静脉、肾动脉、输尿管吻合方法同左侧供肾。1.3.5术后处理缝合移植肾脏上下极的包膜脂肪于腹后壁，以固定移植肾脏，防止血管蒂扭转。分离受体右侧的肾脏血管，结扎切断，同期切除右侧肾脏。温盐水复温，分层缝合关腹，将大鼠置于加热垫上复温，苏醒后喂5%葡萄糖生理盐水，恢复行走后放入鼠笼，正常喂养，定时观察，防止术后尿潴留等，术后存活5d以上表示模型成功。1.4观察指标记录术中两组的热缺血时间，观察术后受体的存活情况，对死亡的受体进行显微镜尸

7、体检验，记录死亡原因。术后10d取移植肾，常规固定，HE染色，观察大鼠的移植肾的病理学变化。2结果从30个供体大鼠切取52只肾脏，分别施行左、右侧供肾原位肾脏移植28、24例。左侧供肾的热缺血时间(27.0±3.5)min，右侧供肾的热缺血时间(29.0±3.0)min，两组移植肾的热缺血时间无明显差异。左侧供肾组发生肾动脉血栓、尿瘘、输尿管梗阻各1例，5d受体存活率为89.3%(25/28)；右侧供肾组发生肾动脉血栓、输尿管梗阻各1例，5d受体存活率为91.6%(22/24)。受体存活率两组比较差

8、异无统计学意义。左右侧供肾的组织学检查未发现明显肾小管坏死的改变。3讨论建立移植动物模型是进行器官移植基础研究的必要条件。大动物因价格昂贵、成本高，遗传背景复杂，而不符合选择实验动物标准化的要求。啮齿类动物的器官移植模型在移植生物学的实验研究中占有重要地位［7］，对器官移植而言，大多数基本原则都是在啮齿类动物模型上建立起来的。大鼠繁殖快，价格便宜，喂养方便，而且大鼠对手术无菌的要求远远低于大动物［8］。目前已培育出了多种品系，如近交系、突变系、杂交群动物、封闭群动物等