小鼠草酸钙肾结石模型建立的初步探索论文

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1、小鼠草酸钙肾结石模型建立的初步探索论文摘要：目的探索一种简便、成石效果好的小鼠草酸钙肾结石模型。方法采用1%乙二醇自由饮水法增加小鼠尿草酸和/或腹腔注射10%葡萄糖酸钙增加尿钙排出量，比较小鼠24小时尿草酸（Ox）、尿钙（Ca2+）、过氧化氢H2O2、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛（MDA）含量，观察肾草酸钙结晶形成情况，免疫组化法观察CD68蛋自在肾脏中的表达位置并用灰度值法计算其表达水平，评价小鼠草酸钙肾结石造模效果。结果单独诱导高草酸尿或高钙尿的小鼠肾内氧化应激指标增高和巨噬细胞浸润增多但未见结晶，同时介导高草

2、酸尿和高钙尿的小鼠肾内氧化应激损伤指标增高和巨噬细胞浸润增多且有较多结晶。结论单独诱导高草酸尿和高钙尿不足以使小鼠肾内生成结晶，同时诱导高草酸尿和高钙尿成石效果好，巨噬细胞可能在肾结晶形成和/或清除中起到重要作用。关键词：草酸钙；肾结石；动物模型；小鼠泌尿系结石草酸钙大鼠动物模型肾结石是一种常见疾病.freelL/kg·d；造模C组：10％葡萄糖酸钙，ip2mL/kg·d造模D组：正常饮水。各组小鼠均在相同的条件下饲养。造模共8周。2．2观察指标及检测方法实验结束前用代谢笼收集并测24h尿量以及用于检测尿草酸（离子

3、色谱法）、尿钙（自动生化分析）、过氧化氢、乳酸脱氢酶、丙二醇的浓度。脱颈椎处死小鼠，切取小鼠的双肾，观察其外观改变，右肾置10％中性福尔马林中固定，作常规HE石蜡切片和VonKossa染色及免疫组化，左肾精密称重后计算各组大鼠的左肾/体重比值。2．3统计学分析实验数据以X±S表示，用SPSS16．0统计软件分析。计量资料组间比较用One．DA、LDH的表达Ox（mg/ml）Ca2+（mmol/ml）左肾体重比值A组0.0671±0.0067#0.0770±0.007180.00777±0.00111#B组0.063

4、7±0.0105#0.2551±0.01401#0.00783±0.00102#C组0.0161±0.0036#0.2718±0.01415#0.00504±0.0007D组0.0190±00420.0789±0.00690.00643±0.00165“#”代表与空白组比较，P0.053．3各组小鼠24h尿乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）含量与D组比较，运用了药物干预的A、B、C3组尿H2O2、LDH浓度显著增加，但三者之间无显著差异（P0.05）；A、B2组尿液MDA、显著增高（P0.

5、05）。表2.各实验组客观指标H2O2、MDA、LDH的表达。H2O2（mmol/ml）MDA（nmol/ml）LDH（U/L）A组49.61±6.345#1.787±0.417#867.83±156.80#B组51.803±6.289#1.603±0.495#905.26±174.42#C组47.163±10.403#0.909±0.381730.99±168.97#D组28.847±7.1660.855±0.230328.65±138.76“#”代表与空白组比较，P0.053．4肾组织病理学检查及钙盐染色检查肾

6、脏病理检查结果显示，造模B组大鼠的肾体积均较对照组(D组)稍大，外观灰白，表面触摸粗糙不平。造模B组出现结晶，镜下可见肾皮质近曲小管大量结晶体(HE染色中晶体为浅黄或棕黄色，VonKossa染色中晶体呈黑褐色)，结晶成堆分布相互连接，部分近曲肾小管细胞疏松水肿、远曲小管扩张以及管腔内可见脱落细胞，肾间质血管充血，可见炎细胞。造模A、C组镜下未见结晶体，仅发现肾间质血管充血。免疫组化病理切片结果提示CD68主要表达于肾脏间质，与D组比较，运用了药物干预的A、B、C3组CD68灰度值显著降低。4讨论肾结石患者可出现高钙

7、、高草酸盐、高无机磷、高钠和低枸橼酸尿等，其中钙与草酸盐的排泄量是形成结石的重要因素，而无机磷排出增加可使磷酸盐易在尿中形成结晶，成为微小核心，介导异质成核过程，导致草酸钙结石的形成；本研究中各组模型动物的各项肾损伤指标结果以及病理切片观察结果显示，造模B组小鼠肾结石模型造模成功,A、C组均无结石形成，说明单独增加尿草酸和尿钙浓度不足以在小鼠体内产生结晶，同时增加尿草酸和尿钙浓度可以成功诱导小鼠草酸钙肾结石。肾结石动物模型以及临床肾结石患者肾脏处于氧化应激的现象，而抗氧化治疗可以减轻肾损伤和肾内结晶情况，因此肾内发

8、生氧化应激损伤在肾结石的发病过程中起到重要的作用3,4。LDH为细胞内酶成分，是胞浆标志酶，只有在细胞壁受损伤的情况下才释放到细胞外，是细胞受损伤的重要指标之一。H2O2是活性氧簇中最主要的组成成分，其含量的多少可以反映ROS的含量。MDA是细胞脂质过氧化反应水平的重要指标。本研究中造模A、B、C3组尿液中LDH、MDA、H2O2含量均高于空白组，说明结石小