大孔吸附树脂分离纯化白头翁皂苷

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1、实验八 大孔吸附树脂分离纯化白头翁皂苷  一、实验目的   ·掌握大孔吸附树脂的性质和使用原理；   ·学习用大孔吸附树脂分离天然亲水性成分的工艺过程以及工艺参数优化方法。  二、实验原理     白头翁（PulsatiLla chinenesis）为常用传统中药，其味苦、性寒，有清热解毒、凉血止痢等功效，现代药理学研究表明其具有抗阿米巴原虫、抗菌、抗滴虫、抗肿瘤作用。白头翁中主要含有皂苷类成分。     大孔吸附树脂是一种不含交换基团的具有大孔结构的高分子吸附剂，是一种亲脂性物质，具有各种不同的表面性质，依靠分子中的亲脂键、偶极离

2、子及氢键的作用，可以有效地吸附具有不同化学性质的各种类型化合物，同时也容易解吸附。大孔吸附树脂按极性强弱分为极性、中极性和非极性三种。大孔吸附树脂具有吸附速度快，选择性好，吸附容量大，再生处理简单，机械强度高等优点。根据反相色谱和分子筛原理，对大分子亲水性成分吸附力弱，对非极性物质吸附力强，适用于亲水性和中等极性物质的分离，可除去混合物中的糖和低极性小分子有机物，被分离组分间极性差别越大，分离效果越好。一般用水、含水甲醇或乙醇、丙酮洗脱，最后用浓醇或丙酮洗脱，再生时用甲醇或乙醇浸泡洗涤即可。     本实验采用D101型大孔吸附树脂

3、提取分离白头翁中的皂苷。  三、试剂与仪器     试剂：D101型大孔吸附树脂，乙醇，白头翁粗粉，正丁醇，醋酸，乙醚，蒸馏水，丙酮，活性炭，棉花、硫酸。     仪器：烧杯，漏斗，滤纸，三角烧瓶，球形冷凝管，索氏提取器，电子天平，恒温水浴，硅胶薄层板，毛细管，色谱柱，色谱层析缸。      四、实验步骤     (1)大孔吸附树脂的预处理  取D101型大孔吸附树脂100g于500mL索氏提取器中，用150mL乙醇回流3h，待回流液1份加3份水无混浊时，取出树脂沥干乙醇，放入蒸馏水中，浸泡待用。     (2)皂苷的提取  取粉碎

4、后得到的白头翁药材粗粉50g，加入200mL工业酒精回流2h，过滤，再重复提取一次，合并滤液，回收乙醇至10mL，加50mL乙醚沉淀，倒出上清液，  过滤，沉淀用水溶解，活性炭脱色、过滤、滤液上柱。     (3)色谱分离  取一玻璃柱，下端塞上棉花，湿法装入已处理好的60g大孔吸附树脂，上端再加少许棉花，取总皂苷液上柱，用水200mL洗脱，再用20%、50%、95%乙醇各200mL洗脱，至洗脱液中不含皂苷，收集各洗脱液。洗脱液20%乙醇、50%乙醇部分各取10mL于水浴加热蒸发浓缩至2mL点样；95%部分于水浴回收至小体积(约30

5、mL)点样用(4)产品的薄层色谱鉴定     色谱材料：硅胶薄层板。 点样：20%乙醇浓缩液、50%乙醇浓缩液、95%乙醇浓缩液。     展开剂：正丁醇-醋酸-水(4：1：1)。     展开方式：预饱和后，上行展开。     显色：10%硫酸液105℃显色。   五、实验结果与讨论     记录实验条件、现象、图谱、斑点颜色、各试剂用量及产品的重量。  六、注意事项     ·配制展开剂时要充分摇匀。 ·用乙醚沉淀时要一边搅拌一边倒入乙醚，使沉淀完全。     ·乙醚沸点低，要注意安全。  七、思考题 1．大孔吸附树脂法提取分离

6、皂苷的原理是什么？有何特点？ 2．为什么要进行树脂的预处理？