大孔吸附树脂法分离纯化山茱萸总皂苷论文

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1、大孔吸附树脂法分离纯化山茱萸总皂苷论文吴红,梁恒,吴道澄，袁忠海【关键词】大孔吸附树脂【Abstract】AIM：TooptimizetheextractionandrefinementoftotalsaponinsfromCornusofficinalisbycolumnchromatographyofmacroreticularresin.METHODS：TotalsaponinsLL-1ofethanolandpurifiedacroreticularresinandelutedLL-1,500mLL-1and700mLL-1ofethanol.Adsorptio

2、ncapabilityandelutionparametersCornusofficinalisenrichedin500mLL-1ofethanolelutingsolution.Thedosageofelutionreagentsesasthesamplevolumeandtheelutiveratioethodsethodtousemacroreticularresintoadsorbandpurifytotalsaponinsincornusofficinalis.【Keyacroreticularresin【摘要】目的：研究并优化大孔树脂法分离纯化山茱萸总皂苷

3、.方法：700mLL-１乙醇提取后，上HPD300型大孔吸附树脂，水洗后分别用300mLL-1，500mLL-1，700mLL-1乙醇洗脱，考察大孔树脂富集、纯化山茱萸总皂苷的吸附性能和洗脱参数，并与常规溶剂提取法相对照.结果：山茱萸总皂苷富集于500mLL-1乙醇洗脱液部分.freelLL-1乙醇回流提取3次［７］，过滤，减压浓缩至无乙醇味，加蒸馏水适量，冰箱内静置过夜，离心得山茱萸样品液(含生药１kgL-1).吸取山茱萸样品液一定量，水浴下挥干，精密加入50gL-1香草醛冰醋酸02mL，08mL高氯酸，振摇混匀后于65℃水浴加热20min，冰水冷却后，加冰醋酸5mL

4、摇匀，随行试剂做空白，554nm处测定A值［8］.1.2.2大孔吸附树脂预处理与再生大孔吸附树脂一般含有未聚合的单体及残留溶剂，使用前须先行除去.树脂用乙醇浸泡2d，倾去上浮物后湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混合不呈现白色乳浊现象即可，然后以大量蒸馏水洗净柱中乙醇，水浸泡备用；再生时用900mLL-1乙醇洗脱至流出液无色，以大量水洗去醇即可.如果树脂颜色较深，可用一定浓度的酸或碱除去吸附性杂质，最后水洗至流出液呈中性.1.2.3洗脱剂浓度的选择精密吸取山茱萸总苷提取液5mL上柱，依次用100mL蒸馏水，300mLL-1乙醇、500mLL-1乙醇、700mLL-1乙醇各6

5、0mL洗脱，水洗脱液每25mL收集1份，乙醇洗脱液每15mL收集1份，比色法测定总皂苷含量，以容量瓶编号和总皂苷含量为坐标绘制洗脱曲线.另吸取人参皂苷Re、蔗糖和谷甾醇的混合溶液2mL，加入大孔树脂柱，依次用水、500mLL-1，700mLL-1，900mLL-1乙醇洗脱，每2mL分段收集，薄层层析检测收集液性质：洗脱液浓缩后点样，正丁醇冰醋酸水(4∶1∶5)上层径向展开，喷苯胺邻苯二甲酸，110℃烘5min，检测糖的特征性斑点；氯仿甲醇水(65∶35∶10)下层展开，喷100gL-1硫酸乙醇，105℃检测皂苷的紫色斑点；另喷200gL-1三氯化锑氯仿溶液，60~70℃

6、显色，检测谷甾醇（脂溶性杂质）.1.2.4大孔树脂吸附容量的测定精密吸取2，4，6，8，10mL的山茱萸总皂苷样品液，分次通过预先处理好的(30±02)g大孔吸附树脂柱，每次用20mL水洗，流出液蒸干，Liebermann反应检测皂苷并测定总皂苷的含量，计算吸附容量.结果见Tab1.表1HPD300型大孔树脂吸附容量测定结果（略）Tab1ResultsofadsorptioncapabilityL分别上柱，蒸馏水洗至流出液无色后，500mLL-1乙醇100mL洗脱，分段收集，测定总皂苷含量.1.2.6两种提取工艺山茱萸总皂苷含量的比较①大孔树脂法分离提取总皂苷：60℃下

7、干燥至恒重的山茱萸500g，6倍量、3倍量、2倍量700mLL-1乙醇提取3次，合并滤液，减压回收乙醇至一定量，加入适量水，继续回收至无醇味，加水使每2mL药液相当于1g原药.药液通过预处理的HPD300大孔吸附树脂柱，水洗至流出液无色后，改用500mLL-1乙醇洗脱，TLC检测洗脱终点.滤液通过铺有少量中性氧化铝的漏斗，减压回收乙醇，水浴上蒸至粘稠状，真空干燥即得山茱萸总皂苷，总皂苷浓度以人参皂苷Re计.②溶剂法：另取干燥至恒重的山茱萸500g，700mLL-1乙醇提取3次，合并滤液，减压浓缩后，加入适量水，乙醚、正丁醇分次萃取，正丁醇