结核分枝杆菌的耐药性检测方法论文

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1、结核分枝杆菌的耐药性检测方法论文【摘要】在应用抗结核药物治疗结核病时，最为临床医师所关注的是细菌产生的耐药性。因为结核分枝杆菌对治疗药物不可避免的产生耐药性，而影响肺结核病的治疗效果。以致成难治型肺结核。【关键词】抗结核药物耐药性检测为使抗结核药物对肺结核病的治疗取得预期效果，在应用药物治疗之先，需要了解几个问题：一、试管内的抑菌浓度把抗结核药物加入培养基内，接种细菌以观察药物在多少浓度下能够抑制细菌生长，求出最小的抑菌药物浓度(MIC)，MIC是临床确定治疗药物剂量的依据。有关抗结核药物的MIC.freeli

2、n，口服法后1～2h，血液内药物浓度即出现高峰曲线。内科研究室用生物学方法，观察链霉素肌注后，药物在体内的吸收，排泄的规律性，提供的技术资料为肺结核病的治疗确定用药剂量和给药次数等以供参考。口服利福平450mg后，按规定时间采集血液、尿液和痰液标本，用生物学方法测定药物在体液内的分布和排泄情况，利福平的吸收和代谢进程。测定结果说明：口服利福平450mg后、3h血清内达到12fcg/ml的药物浓度、而痰液内的药物高浓度是在服药后6h含量3.31μg/ml.3h从尿液内排出的利福平剂量68.5μ/m1，至24h尿液

3、内仍能够排出20μg/ml。对脊椎结核病人应用异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇等药物的代谢进行观察。脓液内的药物浓度高峰曲线出现的时间不同，有的病人脓液内药物高峰曲线出现在4h,.freelg/ml的均匀菌液，备用。试管法：试管法是目前临床细菌学实验室普遍应用的结核分枝杆菌耐药性测定法。具体操作法和步骤，见肺结核病诊断章，结核分枝杆菌实验室诊断技术。微量法：微量法是70年代由川达村氏建立的结核分枝杆菌微型测定器检测耐药性法，又称试剂盒测定法。直立扩散法：直立扩散法是用特制的直立扩散试管进行。试管高度与口径同中试

4、管(18mm×180mm)。在试管上部约1/5处有约45度的弯度，以阻止培养外溢，使试管内培养基厚度保持一致。在试管侧面自下向上标有100mm的刻度，以便直接测出抑菌带高度。2.比率法此种测定法和绝对浓度法用相同培养基。制备一套平行的药物敏感性试验培养基。需要配制多个含药浓度的培养基。同时接种标准结核分枝杆菌(H37RV)和待测菌。以待测菌的最低抑菌浓度和标准菌的最低抑菌浓度之比，接种菌量必需标准化。耐药结果判定：待测菌的耐药比率＞8者为耐药，耐药比率＜2者为敏感、耐药比率为4，按可疑或临界判定。比率法需要进行

5、标准菌株的对测定药物的MIC测定，需要很好设计一套平行的药物试验培养基。操作比较繁多，不举例试验说明。3.耐药比例法比例法是对照培养基和含药培养基、同时接种相同体积的稀释一定浓度的待测菌液。培养一定时间，在某一浓度的含药培养取得可计数菌落数和对照培养基取得可计数菌落数相比，以百分率表示之。大于1％者为耐药。比例法耐药性测定比例法和绝对浓度法一样，均可采用直接耐药性测定法和间接耐药性测定法。直接耐药性测定法是选择涂片抗酸染色阳性痰标本，经稀释后接种。由于痰标本内的细菌数量难以掌握以及对细菌是活菌或死菌的情况不明，

6、接种后的培养基常无细菌生长等因果关系，直接法现不为实验室所应用。菌液浓度，选用接种改良罗氏培养基生长2～3周的旺盛菌落，配1mg/ml的菌液，以灭菌水稀释至10-2、10-4的菌液，分别接种对照培养基和含药培养基(各接种0.01ml)。结果与报告：接种后，37℃孵箱培养4周报告耐药性测定结果。如果对照培养基生长的菌落数目在5个以下，应重复试验，含药培养基未生长出可计数菌落，也应重复试验。计数对照培养基和含药培养基上生长菌落数，计算出耐药菌的百分比。