xpert mtbrif检测脑脊液中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相成法律责任。研究生签名：同蜥导师签章二奶学院鬻：胄甜，，声功I憾》月海日。。’夕河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取

2、得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：问啪导师签章：瑚lV年1月IS日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文XpertMTB／RIF检测脑脊液中结核分枝杆菌及其耐药性的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1／日IJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．16结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21综述结核分枝杆菌分子生物学研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37中文摘要__一—————————————————————————————————————————————————————————————————————一XpertMTB／RIF检测脑脊液中结核分枝杆菌及其耐药性的研究摘要目的：结核性脑膜炎(tuberculousmeningitis，TBM，简称结脑)，是由结核分枝杆菌引起的中枢神经系统感染性疾病，

5、其致残率和致死率均较高。快速、准确的诊断及制定合理的治疗方案是决定预后的关键因素。近年来出现的一种利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(XpertMTB／砒F)，是一种可在2h内检测出结核分枝杆菌并判定其是否对利福平耐药的半巢式多重实时荧光半定量系统。本试验应用该技术对临床诊断为结核性脑膜炎患者及非结核性脑膜炎患者的脑脊液进行结核分枝杆菌检测，探讨其对于脑脊液中结核分枝杆菌检出的敏感性及特异性，并对耐药情况做一分析。方法：结脑组为60例(60人份脑脊液)临床诊断为结核性脑膜炎的患者，所有患者脑脊液均进行

6、常规、生化、细胞学检查，结脑组还进行改良抗酸染色检查，并根据2010年发表在柳叶刀杂志中的关于结脑入组评分标准分为结脑确诊组(38人份脑脊液)、很可能组(11人份脑脊液)及可能组(11人份脑脊液)。对照组为30例(30人份脑脊液)为非结核性脑膜炎患者。所有患者均应用XpertMTB／RIF检测所有患者脑脊液中结核分枝杆菌的特异性rpoB基因片段。收集脑脊液lmL保存于一80"C冰箱内，室温融化后与2倍体积的处理液混匀，涡旋振荡1分钟，取2mL混合液放入仪器中进行核酸扩增，2h内仪器会自动输出结核杆菌检

7、出结果、含菌量及是否对利福平耐药。当6条探针中除了质控探针外至少2条探针发出荧光时可判定为结核分枝杆菌感染，并可根据CT值对结核菌浓度进行高(CT<16)、中(1628)判定。若5条探针并未都发出荧光，说明对利福平耐药。通过对结脑组和组内各组别及非结脑组脑脊液中结核分枝杆菌PCR检出率进行对比分析，探讨该技术对脑脊液中结核分枝杆菌检出的敏感性及特异性。通过对PCR与抗酸染色阳性率差异的分析，比较二者对于诊断结核性脑膜炎的优缺点。通过耐药结核菌的检出率

8、及突变基因的分布，探讨结核分枝杆菌对利福平的耐药情况及耐药分子机制。中文摘要结果：1脑脊液结核分枝杆菌PCR结果：结核性脑膜炎患者60份脑脊液中，经XpertMTB／RIF检测有11份呈阳性，30份对照组中有0份呈阳性，敏感性为18．33％，特异性为100％，结脑组与对照组比较，经统计学分析，P<0．05，差异有统计学意义。2结脑组中各小组结核分枝杆菌PCR结果：确诊组：38份脑脊液中阳性份数9份，阳性率23．68％；很可能组：11份脑脊液中阳性份数2份