苦参碱及联合顺铂用于宫颈癌治疗siha细胞之tslc1基因表达影响

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1、苦参碱及联合顺铂用于宫颈癌治疗SiHa细胞之TSLC1基因表达影响前言宫颈癌(cervicalcancer)是最常见的妇科恶性肿瘤，其患病率仅次于乳腺癌，占全世界女性生殖系统恶性肿瘤的一半以上，其死亡率占女性恶性肿瘤的首位,是严重威胁妇女健康的重要公共卫生问题之一。在发展中国家，由于经济状况低下，医疗水平相对较差，HPV高感染率等各种因素，使得相对于发达国家，宫颈癌的发病率和死亡率都较高。肿瘤是机体在各种内外致病因素的作用下自身正常细胞恶性转化而产生的。随着现代分子生物学发展水平的提高，各项研究表明肿瘤的发生及发展是一个多因素、多阶段、多基因共同参与的过程，从肿瘤

2、的发生到肿瘤的侵袭和转移，存在着一系列基因表达水平的失衡，其中癌基因的激活、抑癌基因的失活和表达减少或缺失导致细胞异常增生和凋亡失街，是肿瘤发生的主要原因之一，但其确切的发病机制至今尚未完全研究清楚。因此，寻找与宫颈癌发生、发展密切相关的基因，探讨其分子水平的发病机制及针对这些基因的药物治疗方法，对宫颈癌的早期诊断、提高宫颈癌治疗效果和患者的生存时间有着积极的意义，并已成为目前宫颈癌研究的重点问题之一。在动物细胞的基因组内原癌基因是普遍存在的，原癌基因是生长因子信号系统的重要组成成分，其表达的蛋白在维持细胞膜的稳定性、相关受体的活化、传递分子信号等方面具有明显的调

3、节作用。在受到各种致癌因素的影响后原癌基因可发生点突变、基因表达改变及染色体易位等变化，由此导致细胞内的原癌基因被激活并表达为癌基因，这是肿瘤发生及发展的关键步骤。抑癌基因又称肿瘤抑制基因，是正常细胞增殖过程中的重要稳定性因素，有诱导组织分化、调节细胞调亡和维持细胞正常生长的功能，它一旦突变、缺失或活化异常，即可导致正常细胞发生癌变。癌症是一类涉及多种细胞基因突变的基因学和后生学的疾病。既往很多学者认为宫颈癌，尤其是宫颈鳞状细胞癌对化疗药物相对不敏感，化疗目前主要是宫颈癌复发或转移患者综合治疗的一部分。但近年来，随着国内外关于胂瘤化学治疗的基础与临床应用研究的迅速

4、进展、新的化疗药物的不断开发、给药途径和方法的不断改进及化疗辅助性药物的深入研究、宫颈癌发病趋势的不断年轻化，使得越来越多的患者日益提高了保留生育功能的要求，以放疗为主、不宜手术早期化疗的治疗原则正在发生着根本性的变化。化疗在宫颈癌的治疗中取得了肯定的疗效，逐渐成为了宫颈癌综合治疗的主要方法之一，并越来越受到国内外学者的重视m。新辅助化疗(NACIO是指在局部治疗(手术或放疗)之前给予的全身化学药物治疗的方法，NACT作为宫颈癌术前的一种辅助性治疗手段，多用于宫颈癌晚期及肿块直径大于4cm的巨块型宫颈癌的病人。研究表明，NACT可使局部病灶明显缩小及降低肿瘤的临床

5、分期，为宫颈癌的根治手术创造了必备条件，并可提高肿瘤放射性治疗的局部控制率。..材料与方法一、实验材料1、人宫颈癌细胞株SiHa细胞株购自兰州大学基础医学院中心实验室；细胞于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养。2、主要试剂及仪器2.1.1RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司2.1.2胎牛血清（FBS)购自杭州四季青公司2.1.3二甲基亚砜(DMSO)购自北京索莱宝科技有限公司2.1.4胰蛋白酶购自美国Sigma公司2.1.5DEPC水购自上海生工生物技术工程有限公司2.1.6氯仿购自浙江巨化集团公司试剂厂2.1.7青霉素购自北京拜尔迪生物公

6、司2.1.8无水乙醇购自杭州长征化工厂2.1.9异丙醇购自浙江巨化集团公司试剂厂2.1.10四甲基偶氮唾蓝（MTT)购自美国Amresco公司2.1.11L-谷氨酷胺购自美国Sigma公司2.1.12庆大霉素购自北京拜尔迪生物公司2.1.13RT-PCR试剂盒购自大连宝生物工程有限公司2.1.14PrimeScriptRTReagentkit购自大连宝生物工程有限公司2.1.1SRNAisoPlus购自大连宝生物工程有限公司2.1.16SYBPremixExTaqII购自大连宝生物工程有限公司2.1.17顺铀购自山东齐鲁制药有限公司2.1.18TSLC1、p-ac

7、tin引物由大连宝生物工程有限公司合成2.1.19苦参碱购自扬子江药业集团有限公司2.1.20蒸馆水由兰州大学第一医院药剂科制备二、实验方法细胞于含谷氨酷胺及l00mg/ml链霉素、l00U/ml青霉素的RPMI-1640培养基中进行培养，内含10%胎牛血清，于37°C5%C02饱和湿度培养箱中传代培养，实验用细胞均处于对数生长期，每2-3d传代1次。血清的灭活：于56°C的水浴箱中将包装完好的胎牛血清充分灭活30分钟，再经过无菌分装后，置于-2°C箱中保存。培养用液的预热：把装有配置好的培养液、0.25%胰蛋白酶消化液和PBS溶液的玻璃瓶

8、放于37&