骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤论文

《骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤论文颜滨余铮李振宇闫洪印【摘要】目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）对脊髓损伤与修复的作用与机制及细胞移植的方法与途径。方法：实验组为将体外培养SD大鼠的MSCs经绿色荧光蛋白（GFP）转染标记后显微注射于脊髓横断模型的脊髓损伤处，并以无血清培养基注射动物为对照组。12周后观察移植细胞的分化情况，并通过行为学、组织学及免疫组化的方法评价脊髓功能变化。结果：实验组MSCs移植12周后，脊髓功能明显恢复。结论：骨髓间充质干细胞移植对脊髓的损伤修复具有明显作用。【关键词

2、】骨髓间充质干细胞；移植；脊髓损伤；细胞培养〔Abstract〕ObjectiveToinvestigatethemethodsthathoodles.Beforethetransplanting,theMSCsmunohistochemistryandangiogenesisentobtainedthehighpureMSCs.TheMSCscanstabilizetospreadthegenerationtobinethecord.ConclusionThetransplantationusing

3、thecellsprovedthatMSCsayalloalstemcells;Transplante;Spinalcordinjury;Cultureofcell脊髓损伤的修复是近年热点课题。骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）由于具有较强的增殖能力和多向分化潜能，可用来作为细胞移植的供体细胞来源1。本实验通过将MSCs移植于损伤的脊髓，研究其在缺血微环境下的分化增殖潜能以及其对于脊髓损伤的作用。1材料和方法1试剂与仪器IMDM（Iscove'somdifiedDu

4、lbecco'smedium），Gibco公司；胎牛血清（FBS）Hyclone公司；分离液，胰蛋白酶和EDTA；可吸收性明胶海绵.freelin，无菌条件下取下肢长骨，显露骨髓腔，用含15%胎牛血清的IMDM培养液冲洗骨髓腔获取骨髓细胞，将冲洗液收集于离心管中，2000r/min离心15min，弃上清及脂肪层，取沉淀，用IMDM培养液混匀，轻轻地层加到比重为1077g/mL的淋巴细胞分离液上，2000r/min离心10min，收集中间的单核细胞层。用IMDM培养液1000r/min离心洗涤10min

5、，然后收集细胞，用含15%胎牛血清的IMDM培养液混匀后接种于培养瓶中，置于37℃含5%的CO2孵箱中培养，每3d换液1次，原代细胞生长至90%融合时，用0.25%胰酶和0.1%EDTA消化后按1:3的比例传代。移植前对间充质干细胞进行GFP转染。离心并计数细胞2。1.2.2大鼠脊髓横断模型的建立及骨髓间充质干细胞的移植按40mg/kg剂量麻醉大鼠，麻醉后固定于立体定向仪上，以T10为中心，设计切口。在显微镜下，无菌操作切除T10全椎板及T9、T11部分椎板，显露脊髓，剪开硬膜及软膜，以特制探针横预置

6、3-0丝线于待损伤脊髓腹侧硬膜外。外剃须刀片于预置线头侧0.5mm（T9水平）将脊髓横断，顺利由腹侧向背侧提出预置线，明胶海绵轻柔压迫止血。5L的微量注射器预制微量注射管道，预制玻璃电极作为显微注射针头，外径100m，内径80m，高压消毒；在距脊髓断端选用1mm的平面与正中线交点为进针点，每一进针点的不同深度1.75、1.25、1.00mm和0.50mm分别注射0.5L（50000个），总计每侧端植入200000个。两断端分别注射，注射速度0.1L/min，每注射位点留针5min。无细胞移植组（空白对

7、照），用同样方法及部位注射0.5L的无血清的D/F12培养液。1.2.3术后大鼠的饲养及护理常规方法笼内饲养，术后3~7d内视情况给予青霉素500U/200g，腹腔注射，每日8:00、16:00各挤尿1次，夜间不喂水，大鼠体重变化的观察，用天平准确称量1~20号大鼠重量，精确到克，术后1、2、3、4周分别称重记录。1.2.4应用BBB法对存活的大鼠进行神经功能评价3主要观察：后肢髋、膝、踝关节的活动度；躯干及腹部的状态：是否有畸形；行走时是否稳定；腹部是否贴地。后爪的着地状态。行走步态：是否有行走；是

8、否协调；是否有弹趾动作。后爪触地和离地时的状态：内旋，外旋，平行。尾部状态。分别在术后4、6、8、9、10、11、12周对存活的24只大鼠的神经功能恢复情况进行观察，观察每只大鼠左右肢功能，按照量表打分，统计处理。1.2.5顺行示踪标记4原切口入路，显露原脊髓横断处，选取距横断水平头侧5mm为示踪剂注射平面，正中及旁开0.5mm为垂直进针点。中央进针点的不同深度1.75、1.25、1.00mm和0.50mm，两旁侧进针点不同深度为1.50、1.25、1.