医学论文-骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤

《医学论文-骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、医学论文-骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤                          作者：颜滨余铮李振宇闫洪印【摘要】 目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）对脊髓损伤与修复的作用与机制及细胞移植的方法与途径。方法：实验组为将体外培养SD大鼠的MSCs经绿色荧光蛋白（GFP）转染标记后显微注射于脊髓横断模型的脊髓损伤处，并以无血清培养基注射动物为对照组。12周后观察移植细胞的分化情况，并通过行为学、组织学及免疫组化的方法评价脊髓功能变化。结果：实验组MSCs移植12周后，脊髓功能明显恢复。结论：骨髓间充质干

2、细胞移植对脊髓的损伤修复具有明显作用。【关键词】 骨髓间充质干细胞；移植；脊髓损伤；细胞培养   〔Abstract〕   Objective    To investigate the methods that how the MSCs wok on the spinal cord injury.  And try to find the ways to plant MSCs.   Methods    The MSCs were transplanted into the spinal cord of SCI   m

3、odles. Before the transplanting, the MSCs were transfected with EGFP.12 weeks after transplantation, MSCs' difference were observed, SPECT, immunohistochemistry and angiogenesis were observed to detect the effects on spinal cord.    Results    This experiment obt

4、ained the high pure MSCs. The MSCs can stabilize to spread the generation to combine the cord.    Conclusion    The transplantation using the cells proved that MSCs wasvery useful inthe recovery of spinal cord injury Which may allow us to rebuild those conditions

5、 to repair and regrow the spinal cord.   〔Key Words〕   Mesenchymal stemcells; Transplante; Spinal cord injury; Culture of cell   脊髓损伤的修复是近年热点课题。骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）由于具有较强的增殖能力和多向分化潜能，可用来作为细胞移植的供体细胞来源[1]。本实验通过将MSCs移植于损伤的脊髓，研究其在缺血微环境下的分化增殖潜能以及其对于脊髓损伤

6、的作用。   1   材料和方法   1   试剂与仪器   IMDM（Iscove'somdifiedDulbecco'smedium），Gibco公司；胎牛血清（FBS）Hyclone公司；分离液，胰蛋白酶和EDTA；可吸收性明胶海绵，南京第三制药厂；戊巴比妥钠，佛山市化工实验厂；0.2%乳酸环丙沙星，北京双鹤制药厂；乳酸钠林格氏液，北京双鹤制药厂；FLUOROGOLD，FLOROCHROME公司；FLUOROGOLD，FLROCHROME公司；PHA-L单抗，兔源性；牛血清白蛋白，SIGMA公司；生物素化羊抗兔Ig

7、G，SIGMA公司；EXTRAVIDINPEROXIDASE，SIGMA公司；DAB，SIGMA公司；TRITONX-100，SIGMA公司；葡萄糖氧化酶，SIGMA公司。实验动物，3~4周龄的SD大鼠，雌雄不限，由中山大学动物实验中心提供。   1.2   方法   1.2.1   大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及标记   将SD大鼠颈椎脱臼处死后，75%酒精浸泡5min，无菌条件下取下肢长骨，显露骨髓腔，用含15%胎牛血清的IMDM培养液冲洗骨髓腔获取骨髓细胞，将冲洗液收集于离心管中，2000r/min离心15min

8、，弃上清及脂肪层，取沉淀，用IMDM培养液混匀，轻轻地层加到比重为1077g/mL的淋巴细胞分离液上，2000r/min离心10min，收集中间的单核细胞层。用IMDM培养液1000r/min离心洗涤10min，然后收集细胞，用含15%胎牛血清的IMDM培养液混匀后接种于培养瓶中，置于37℃含5%的CO2孵箱中培养，