甲型与乙型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的比较论文

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1、甲型与乙型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的比较论文桂芳，张卓然，段于峰，周志航，滕兰菊，李争鸣【摘要】目的观察并比较不同流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡能力的差异。方法A1、B型流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别感染HeLa细胞，于不同时间取HeLa细胞分别在电镜下观察细胞的形态，AnnexinVFITC染色流式细胞仪检测凋亡百分率。结果A1亚型及B型流感病毒作用于HeLa细胞后24h.freelercellsinducedbydifferentinfluenzaviruses.MethodsTheshapesofHeLacellsindifferenttimeicroscopeaftert

2、heyetry(FCM)toobservethepercentageofapoptosis.ResultsTypicalapoptosisinHeLacellsicroscopeafterinfectedbyinfluenzavirusestypeA1andB24hours.Thepercentageofapoptosisincreasedalongeexpandedandculminatedfrom12to24hours.ThemaximaofthepercentageofapoptosisinducedbyinfluenzavirustypeB,A1,ultraviolete

3、xposureinfluenzaBvirus(UVB)andultravioletexposureinfluenzaA1virus(UVA1)eto38.65%,23.94%,18.20%and10.05%respectively.TherehavesignificantdifferencebetorestrongthaninfluenzaAvirusintheabilityofinducingapoptosis.Moreover,theultravioletexposureinfluenzavirusperhapsstillhasthecertainabilityofind

4、ucingapoptosisinHeLacells.paredentofcancer.Keyercell；Apoptosis0引言细胞凋亡是细胞在生理或病理信号刺激下，启动自身凋亡相关基因而发生的主动“自杀”过程。近年来的许多研究表明，流感病毒可诱导多种细胞发生细胞凋亡，包括其容纳细胞和非容纳细胞，特别是A型流感病毒研究较多。由于流感病毒可诱导多种肿瘤细胞发生细胞凋亡，因此为肿瘤治疗提供了一个新的研究方向。1材料与方法1.1材料1.1.1病毒与细胞流感病毒（A1/京防861、B/沪防931）均购自武汉大学中国典型培养物保藏中心；HeLa细胞为大连医科大学微生物教研室保存的传代

5、细胞。1.1.2主要试剂与仪器AnnexinVFITCapoptosisdetectionkitⅠ试剂盒购自BD公司。透射电子显微镜（JEM2000EX），流式细胞仪（FACSVantageTMSE），酶标仪（model3550，biorad公司）。1.2方法1.2.1病毒培养将流感病毒A1亚型和B型分别接种于9~11日龄鸡胚尿囊腔，35℃孵育48~72h，收获尿囊液经3000r/min离心15min，取上清液检测血凝效价，取血凝效价1∶640的尿囊液低温保存备用。紫外线照射的流感病毒对照制备方法：分别将流感病毒液2ml置于无菌小试管内，置于紫外灯下40cm处照射30min。

6、1.2.2HeLa细胞凋亡的形态学检测HeLa细胞用RPMI1640生长液传代培养，待长至80%单层时，将A1亚型及B型流感病毒用维持液稀释至1∶64，各取0.5ml分别感染细胞，37℃吸附1h，换维持液，于感染后24h观察细胞病变，并收集细胞，立即加入2.5%戊二醛固定，经脱水、包埋、切片、枸橼酸铅和醋酸铀双染色后在透射电镜下观察细胞的超微结构改变。同时设不加病毒的阴性对照。1.2.3AnnexinVFITC/PI染色检测细胞凋亡分别取效价为1∶64的A1亚型及B型流感病毒0.5ml接种至长成80%单层的HeLa细胞，37℃吸附1h，弃去病毒液，加入维持液1ml。于接种后4

7、、8、12、24、48h收集细胞，用冷PBS洗涤2次，调整细胞浓度为1×106个/ml，取100μl进行染色，流式细胞仪检测细胞凋亡。同时设不加病毒的阴性对照及经紫外线照射的流感病毒（A1及B）对照。1.3统计学分析采用SPSS12.0统计软件，凋亡百分率的比较用t检验法。2结果2.1流感病毒诱导HeLa细胞凋亡的形态学观察2.1.1A1亚型流感病毒作用于HeLa细胞后的形态学观察A1亚型流感病毒作用于HeLa细胞后24h，透射电镜下显示早期凋亡细胞，细胞表面微绒毛消失，体积缩小