甲型与乙型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的比较

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1、甲型与乙型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的比较作者：桂芳，张卓然，段于峰，周志航，滕兰菊，李争鸣【摘要】目的观察并比较不同流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡能力的差异。方法A1、B型流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别感染HeLa细胞，于不同时间取HeLa细胞分别在电镜下观察细胞的形态，AnnexinVFITC染色流式细胞仪检测凋亡百分率。结果A1亚型及B型流感病毒作用于HeLa细胞后24h，电镜下可见细胞凋亡的特征性改变，且凋亡百分率随时间延长而增高，于12~24h达高峰，其中B型流感病毒的凋亡诱导率最高达38.65%，A1亚型最高为23.94%。紫外线照射后的

2、B型流感病毒（UVB）最高达到18.20%，UVA1最高达到10.05%，A1亚型与B型相比差异有统计学意义（P<0.01）。结论B型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的能力比A型流感病毒强，而且经紫外线照射后的流感病毒可能仍然具有一定的诱导细胞凋亡能力；在肿瘤治疗方面，B型流感病毒比A型流感病毒具有更大的研究和应用价值。【关键词】流感病毒；肿瘤细胞；细胞凋亡　　Abstract：ObjectiveToobserveandparethedifferenceofapoptosisintumercellsinducedbydifferentinflue

3、nzaviruses.MethodsTheshapesofHeLacellsindifferenttimeicroscopeaftertheyetry(FCM)toobservethepercentageofapoptosis.ResultsTypicalapoptosisinHeLacellsicroscopeafterinfectedbyinfluenzavirusestypeA1andB24hours.Thepercentageofapoptosisincreasedalongeexpandedandculminatedfrom12to24h

4、ours.ThemaximaofthepercentageofapoptosisinducedbyinfluenzavirustypeB,A1,ultravioletexposureinfluenzaBvirus(UVB)andultravioletexposureinfluenzaA1virus(UVA1)eto38.65%,23.94%,18.20%and10.05%respectively.TherehavesignificantdifferencebetorestrongthaninfluenzaAvirusintheabilityof

5、inducingapoptosis.Moreover,theultravioletexposureinfluenzavirusperhapsstillhasthecertainabilityofinducingapoptosisinHeLacells.paredentofcancer.　　Keyercell；Apoptosis　　0引言　　细胞凋亡是细胞在生理或病理信号刺激下，启动自身凋亡相关基因而发生的主动“自杀”过程。近年来的许多研究表明，流感病毒可诱导多种细胞发生细胞凋亡，包括其容纳细胞和非容纳细胞，特别是A型流感病毒研究较多。由于流感病毒可

6、诱导多种肿瘤细胞发生细胞凋亡，因此为肿瘤治疗提供了一个新的研究方向。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1病毒与细胞流感病毒（A1/京防861、B/沪防931）均购自武汉大学中国典型培养物保藏中心；HeLa细胞为大连医科大学微生物教研室保存的传代细胞。　　1.1.2主要试剂与仪器AnnexinVFITCapoptosisdetectionkitⅠ试剂盒购自BD公司。透射电子显微镜（JEM2000EX），流式细胞仪（FACSVantageTMSE），酶标仪（model3550，biorad公司）。　　1.2方法　　1.2.1病毒培养将流

7、感病毒A1亚型和B型分别接种于9~11日龄鸡胚尿囊腔，35℃孵育48~72h，收获尿囊液经3000r/min离心15min，取上清液检测血凝效价，取血凝效价>1∶640的尿囊液低温保存备用。紫外线照射的流感病毒对照制备方法：分别将流感病毒液2ml置于无菌小试管内，置于紫外灯下40cm处照射30min。　　1.2.2HeLa细胞凋亡的形态学检测HeLa细胞用RPMI1640生长液传代培养，待长至80%单层时，将A1亚型及B型流感病毒用维持液稀释至1∶64，各取0.5ml分别感染细胞，37℃吸附1h，换维持液，于感染后24h观察细胞病变，并收集

8、细胞，立即加入2.5%戊二醛固定，经脱水、包埋、切片、枸橼酸铅和醋酸铀双染色后在透射电镜下观察细胞的超微结构改变。同时设不