异基因造血干细胞移植后受者骨髓的间充质干细胞来源研究论文

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1、异基因造血干细胞移植后受者骨髓的间充质干细胞来源研究论文.freelalStemCellsinBoneMarroCellTransplantationAbstractTheaimofthisstudyarroesenchymalcellsin34patientsismatchedhematopoieticstemcellstransplant(HSCT).Themesenchymalstemcells(MSC)from34patientsetry(FCM)torevealthecellsurfaceanti

2、genexpression.Thepolymerasechainreaction(PCR)analysisoftheamelogenin(AMEL)geneshostcells.TheculturedMSCosomesX(Xp11.1-Xq11.1)andY(Yq12)todistinguishdonorcellsfromhostcells.Theresultsindicatedthat31outof34casesshoaand24outofthese31casesorethan5generationsbe

3、rofCD14+CD45+cells，onocyte/macrophagefromtheculturedMSC(passage5)arrothepassage5onstratedthatmarrothepassage5arrocelltransplantationedtobederivedstillfromtherecipientstheirootopoieticstemcelltransplantation;allogeneichemotopoieticstemcelltransplantation;me

4、senchymalstemcells源于人骨髓的间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSC），占骨髓中有核细胞的0.01%-0.001%。从骨髓中分离出的MSC能在体外大量扩增且具有自我更新的能力［1］。MSC能产生多种细胞因子、化学因子及细胞外基质蛋白，在造血细胞的生长、成熟、归巢及增殖中均具有重要的作用［2-5］。在异基因造血干细胞移植(allogeneichematopoieticstemcelltransplantation，allo-HSCT)临床植活的患者中MSC是否为供者植

5、活一直存有争议［6-11］，目前对SCT后患者MSC的来源问题尚无定论。本研究选择临床上供受者性别不同的allo-HSCT后临床造血植活的34例患者作为研究对象，对allo-HSCT后造血植活患者中骨髓源的MSC的植活来源，进行了研究。材料和方法病例病例来自北京大学人民医院或北京道培医院，为供受者性别不同、造血植活的allo-HSCT患者共34例，其中男性17例，女性17例，年龄介于16至48岁之间。预处理包括马利兰（busulfan，Bu）/环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）或Bu/CT

6、X加抗胸腺细胞球蛋白（antithymocyteglobulin，ATG）。造血干细胞来源为：骨髓移植者3例，动员的外周血干细胞移植者2例，骨髓加动员的外周血干细胞移植者19例，骨髓加动员的外周血干细胞再加第三者脐血混合移植者10例。移植后给予的免疫抑制剂：氨甲喋呤（methotrexate，MTX），霉酚酸酯（mycofenolatemofitile，MMF）及强的松等。利用荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）、人类白细胞抗原(humanleucocyt

7、eantigen，HLA)分型及短串联重复序列聚合酶链反应（shorttandemrepeat-polymerasechainreaction，STR-PCR）等方法进行造血植活及嵌合分析（附表）。Table.Characteristicsof34patientsreceivedHSCT（略）MSC的分离及纯化对患者及供者行髂后上棘穿刺抽取骨髓血10ml，骨髓用PBS(0.01mol/L，pH7.4)1∶1稀释后，Percoll（比重1.073g/ml）900×g梯度离心30分钟，离心后收获分离的单个核细胞

8、，用DMEM-LG洗2次，以1.4×105/cm2的细胞密度接种于T-25培养瓶中，培养基DMEM-LG（GibcoBRLlifeTechnologies，USA）含10%FBS，在37℃，5%CO2条件下孵育。每3天全量换液，待细胞长至85%至90%融合时，用0.25%胰蛋白酶-1mmol/LEDTA(GibcoBRLlifeTechnologies，USA)37℃条件下消化3-5分钟，以1.3×104/cm2