江苏连钱草高效液相色谱指纹图谱研究论文

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1、江苏连钱草高效液相色谱指纹图谱研究论文朱玲英，钱大玮，段金廒，钱士辉【摘要】目的研究建立连钱草高效液相色谱（HPLC）指纹图谱分析方法，为其质量控制和药材鉴别提供依据。方法利用高效液相色谱法，采用反相SymmetryC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈和0.4%磷酸溶液（梯度洗脱）；检测波长327nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。进样体积20μl。结果在选定的色谱条件下确定18个峰构成连钱草药材的指纹特征,各批次药材均具有上述特征,但特征峰的相对含量分布差异导致色谱概貌

2、存在一定差异。确定了连钱草药材HPLC中绿原酸、木犀草素二个黄酮成分所对应的保留时间一致;10个批次的连钱草药材HPLC指纹图谱相似度均大于0.93。结论该方法准确、简单、稳定，其色谱指纹图谱可用于连钱草的鉴别和质量控制。【关键词】Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCfingerprintofHerbaGlechomae.MethodsTheHPLCmethodatographyconditionsmetryC18column(250mm×4.6mm,5μm)ob

3、ilephaseofacetonitrile--0.4%phosphoricaciddihydrogenphosphatesolutionofandcolumntemperaturel/min;theinjectionvolumeatographycondition,eighteenpeaksae.Allsamplestestedcontainedthesameeighteenpeaks,butthecontentofeachpeakshoongthesamples,atograms.Theret

4、entiontimeofCaffeotannicacidandluteolininHerbaGlechomaeined.Thefingerprintshoilarityinsamplesfromdifferenthabitats.ConclusionThemethodisexact,simpleandaccurate,andcanbeusedfortheidentificationandqualitycontrolofHerbaGlechomae.Keyae;Fingerprint;HPLC连钱草

5、为唇形科活血丹属植物活血丹Glechomalongituba(NaKai)Kupr．的干燥地上部分.freelpoaPure乙腈为色谱纯，甲醇为色谱纯（江苏汉邦科技有限公司），其它试剂均为分析纯。对照品：木犀草素由（江苏省中医药研究院化学研究室提供）纯度达98%以上；绿原酸标准品由中国生物药品鉴定所提供；药材江苏省盱眙县。2方法2.1色谱条件色谱柱为SymmetryC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；检测波长327nm；柱温30℃；流动相为（A）乙腈和（B）0.4%磷酸溶液，（12∶88）

6、梯度洗脱，运行时间90min。1～70min乙腈从12%线性梯度至76%；70～75min线性梯度至12%；75～90min线性梯度至12%。流速：1.0ml/min；进样量20μl。2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸，木犀草素对照品适量分别用甲醇溶解稀释并定容，得对照品溶液,浓度分别为绿原酸45.5μg/ml，木犀草素0.146mg/ml，再分别精密吸取1ml，置5ml容量瓶中，加甲醇稀释致刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。2.3供试品溶液的制备精密称取连钱草细粉约2.5g置索氏提取器中，加入乙

7、醚100ml，水浴回流至无色，回收乙醚，将药渣中乙醚挥干，继用80ml甲醇提取至无色，放冷，移至100ml容量瓶内，并用甲醇定容至刻度，摇匀，取上清液经0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。3结果3.1图谱测定时间的确定取样品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，按选定的梯度洗脱，记录90min内色谱图，结果表明60min后无有意义峰出现，故确定图谱记录时间90min。3.2精密度实验精密称取连钱草1号样品细粉2.5g，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，连续重复进样6次，记录指纹图谱。考察各共有

8、峰相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，结果显示各共有峰相对保留时间RSD为0.01%～0.35%，相对峰面积的RSD为0.36%～2.49%，符合指纹图谱研究技术的要求［5］。3.3重复性实验精密称取连钱草2号样品细粉6份，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，进行测定，考察各共有峰相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，各共有峰相对保留时间的RSD为0.01%～0.14%，相对峰面积的RSD为0.28%～2.83%，符合指纹图谱研究技术的要求［6］。3.4样品指纹图谱测定分别取不同