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1、延胡索中紫堇碱标准品的制备及含量测定论文白雪肖海涛杨杰朱洁郝小燕【摘要】目的研究延胡索中紫堇碱标准品的制备及含量测定方法。方法运用半制备高效液相色谱法分离纯化紫堇碱，采用薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法检测纯度，波谱法鉴定其结构，反相高效液相色谱法测定延胡索药材中紫堇碱的含量。结果制备的化合物鉴定为紫堇碱，纯度为99.5％；含量测定在0.1312～1.1312μg范围内呈良好线性关系，r=0.999997，平均回收率为97.19％，RSD为2.25％（n=9）。结论该制备方法效率高.freelinationmethodofcorydali
2、neinCorydalisyanhusuoethodsThecorydalinei-preparativehighperformanceliquidchromatograph.ItspurityinedbyTLCandHPLCanalysisandnormalizationofpeakareas.Thestructureofcorydaline,andthequantificationinedbyRP-HPLC.ResultsThepoundethodisquickandconvenientforproducingthepurepoundsf
3、romherbsethodisaccurateandsimplei-preparativehighperformanceliquidchromatograph；RP-HPLC延胡索CorydalisyanhusuoS为内标)；KQ-250B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；高效薄层层析板(GF254，青岛海洋化工厂生产)；甲醇、乙睛为色谱醇，其他化学试剂均为分析醇，水为纯净水。延胡索药材采自浙江省东阳市，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoC18柱(5μm,250mm×4.6mm)，柱温30
4、℃；检测波长280nm，流动相为0.10％的磷酸(三乙胺调pH=6.0)-乙睛(48∶52)，流速1.00ml/min。2.2.3紫堇碱对照品的制备纯化取紫堇碱粗提物1.0g，用10ml甲醇超声溶解，过0.45μm滤膜，备用。吸取1.0ml样品进半制备型高效液相色谱仪，收集保留时间所在的组分，减压回收溶剂，得紫堇碱粉末。加乙醇适量溶解，重结晶，即得。2.3纯度分析2.3.1薄层色谱分析薄层板：高效薄层层析板(GF254)。3种展开剂系统：正丁醇-乙酸-水（10∶1∶0.5）；醋酸乙酯-氯仿-甲醇-二乙胺(8∶2∶2∶1)；乙醚-环己烷-甲醇（
5、5∶3∶0.5）。点样：在同一板上，按20，40，60，80，100μl不同的浓度点样。展距8cm，定位后经紫外254nm、碘蒸气及碘化铋钾溶液显色检视。结果在薄层色谱同一位置处，均为单一斑点，未见杂质斑点，符合化学品要求。2.3.2紫外检测取紫堇碱对照品乙醇溶液经紫外光谱扫描，结果表明最大吸收波长为280nm，因此，确定280nm为测定波长。2.3.3面积归一化法精密称取紫堇碱对照品，用流动相制成浓度为0.13mg·ml-1的样品溶液，按照“分析HPLC色谱条件”，进样10μl，样品显示为单峰，用面积归一化法计算含量为99.5％（保留时间为
6、12.15min），符合中药化学对照品含量测定用要求。结果见图1。2.4结构鉴定紫堇碱为无色棱状柱晶（乙醇），熔点135℃。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:0.95(3H,d,J=6.8Hz,CH3),2.60(2H,m,5-H),3.10(2H,.freel,6-H),3.22(1H,m,13-H),3.50(1H,d,J=16.0Hz,H-8α),3.69(1H,s,14-H),3.87(12H,m,4-OCH3),4.20(1H,d,J=16.0Hz,8-Hβ),6.61(1H,s,4-H),6.69(1H,s,1-H),6.
7、82(1H,d,J=8.4Hz,11-H),6.91(1H,d,J=8.4Hz,12-H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ:18.3(-CH3),29.2(C-5),38.2(C-13),51.3(C-6),54.4(C-8),55.7(OCH3),55.8(OCH3),56.0(OCH3),60.0(OCH3),62.9(C-14),108.5(C-1),110.8(C-4),111.0(C-4),124.0(C-12),128.5,128.4,128.2(C-4a,-14a,-8a),134.8(C-12a),144.7(C-
8、10),147.0(C-2),147.5(C-3),150.0(C-9)。以上波谱数据与文献报道［5］的一致，故鉴定为紫堇碱。2.5延胡索中紫堇碱的含量测定2.5.
