增生性玻璃体视网膜病变增生膜中α┐平滑肌肌动蛋白的表达论文

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1、增生性玻璃体视网膜病变增生膜中α┐平滑肌肌动蛋白的表达论文.freelmuno-histochemistryAbstract:AIMToinvestigatetheexpressionofalpha-smoothmuscleactin（α-SMA）em-brane（PRM）ofPVR.METHODSFourteenspecimensofPRMiesofpatientssufferedfromPVRofdifferentgrades.α-SMAexpressioninPRMmunohistochem

2、icalstaining，andquanti-tativeanalysisperformedbyimageprocessofimmunofluo┐rescence.RESULTSα-SMAexpressiona，andaccordanceonfeatureofPRM，andtheexpressioncorrelatedembranetraction.0引言增生性玻璃体视网膜病变（proliferativevitreo-retinopathy，PVR）属于眼内组织创伤愈合的一种特殊表现，可以分为炎症

3、期、细胞增生期和瘢痕期三个阶段，其中在细胞增生期可以形成视网膜表面的增生膜组织（PRM），这些膜组织在瘢痕期可以明显收缩，形成对视网膜的牵拉而导致视网膜脱离［1，2］.视网膜色素上皮细胞（RPE）是参与增生膜形成的主要细胞之一，在PVR病变过程中可以有明显的形态改变，部分RPE可以转化为肌纤维母细胞样细胞而具有收缩功能［3］.α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）是一种有收缩功能的细胞骨架微丝结构［4］.McGillem［5］等曾报道:在PVR病变的增生膜中有多种细胞表达α-SMA，但针对α-SMA在增

4、生膜中的整体表达及其与PVR病变程度的相关性研究，尚未见报道.本实验采用免疫组化技术，观察PVR的视网膜前膜中α-SMA的表达情况.1材料和方法1.1材料标本来源于1998-07/1999-11在本院眼科住院的孔源性视网膜脱离伴PVR患者14名，年龄4～63岁，病程2mo～2a.PVR分级标准参照1983年美国视网膜学会分级方法，分级为C3-D3.以上患眼行玻璃体切割术时取视网膜表面增生膜，其中下膜5例，前膜9例.以上组织用40gL-1多聚甲醛固定30min，4℃.经脱水、透明和浸蜡，制成腊块，然

5、后制成5μm厚的切片，贴附于载玻片上.小鼠抗人的α-SMA单克隆抗体（1∶200;中国博士德公司），DAB免疫组化试剂盒（DAKO公司，丹麦），Avidin标记的TexasRed（MolecularProbes，美国）.1.2方法1.2.1免疫组织化学染色及免疫荧光切片浸入7.5mLL-1H2O2-PBS，37℃，30min，以阻断内源性过氧化物酶.正常羊血清封闭消除非特异性染色.滴加小鼠特异性抗体，在湿盒内37℃保温30min.PBS振洗3次，滴加生物素化羊抗小鼠IgG，在湿盒内37℃保温30m

6、in，免疫组织化学染色法滴加ABC复合剂，37℃保温30min.加入显色剂显色，镜下观察，水洗中止反应，苏木精复染核，脱水透明封片.免疫荧光法加入抗生物素化标记的TexasRed，37℃保温30min.缓冲甘油封片.采用人大隐静脉血管组织作为阳性对照;采用人类角膜移植后供体眼的眼后段组织，包括视网膜色素上皮细胞（RPE）、视网膜组织、脉络膜和巩膜，以及不加一抗的标本作为阴性对照，与手术取材标本平行染色.1.2.2结果判定和分析免疫组织化学DAB染色法的结果:在OLMPUS显微镜（BX50）下观察，

7、以背景清晰、棕黄色部位定位明确的细胞作为阳性细胞，在200倍视野下，计数阳性细胞比例.TexasRed荧光标本在BIO-RED共聚焦显微镜（MR-1024）下观察，作定量分析:任意选一视野，在相同面积下计数荧光总量.2结果阳性对照组显示均对所用的单克隆抗体呈阳性反应:DAB染色阳性细胞胞质中呈现棕色或深棕色的颗粒，细胞核经复染成蓝色;TexasRed在595nm激光激发下，阳性部位发出深红色颗粒样荧光.阴性对照组中未见阳性染色及荧光.DAB染色结果显示，在14例PRM中α-SMA均有阳性表达，但其

8、表达的程度有所差别.在6例PVR/C3级的PRM中，可见细胞成份较多，细胞间质较少，α-SMA表达阳性细胞的比例为35/80，呈散在分布，随分布区域的不同细胞染色以及形状表现有差异:在膜的表面可见少量染色较深，胞体呈梭形，胞核呈圆形或卵圆形的阳性细胞;在细胞较多的区域，阳性细胞数目较多，染色较浅淡，胞体为长圆形，胞核呈圆形，在部分阳性细胞中可见色素存在（Fig1（略））;在膜的中央组织中可见少量阳性细胞，胞体呈狭长的梭形，与标本的长径走行方向平行;在8例D级PRM中，α-SMA阳性