增生性玻璃体视网膜病变增生膜中α┐平滑肌肌动蛋白的表达

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1、增生性玻璃体视网膜病变增生膜中α┐平滑肌肌动蛋白的表达　　摘要:目的观察PVR增生膜中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达.方法用免疫组化染色法和免疫荧光法对14例视网膜脱离伴PVR行玻切术时切除的增生膜（PRM）进行检查、分析.结果免疫组化染色法显示α-SMA在14例PRM中均有表达，位于胞质中，其分布与PRM的收缩方向一致.在200倍视野下，PRMC级膜中α-SMA阳性细胞比例为35/80，D级膜中α-SMA阳性细胞比例为50/60;免疫荧光法结果与染色法相符.荧光定量分析:PRMC级膜中α-S

2、MA阳性荧光总量12.31.D级膜中α-SMA阳性荧光总量23.09，约为C级膜的1.88倍（P<0.01）.结论α-SMA存在于PVR增生膜中，与病变程度和膜的收缩过程有关.　　Keymuno-histochemistry　　Abstract:AIMToinvestigatetheexpressionofalpha-smoothmuscleactin（α-SMA）em-brane（PRM）ofPVR.METHODSFourteenspecimensofPRMiesofpatientssuffe

3、redfromPVRofdifferentgrades.α-SMAexpressioninPRMmunohistochemicalstaining，andquanti-tativeanalysisperformedbyimageprocessofimmunofluo┐rescence.RESULTSα-SMAexpressiona，andaccordanceonfeatureofPRM，andtheexpressioncorrelatedembranetraction.　　0引言　　增生性玻璃体视网膜

4、病变（proliferativevitreo-retinopathy，PVR）属于眼内组织创伤愈合的一种特殊表现，可以分为炎症期、细胞增生期和瘢痕期三个阶段，其中在细胞增生期可以形成视网膜表面的增生膜组织（PRM），这些膜组织在瘢痕期可以明显收缩，形成对视网膜的牵拉而导致视网膜脱离［1，2］.视网膜色素上皮细胞（RPE）是参与增生膜形成的主要细胞之一，在PVR病变过程中可以有明显的形态改变，部分RPE可以转化为肌纤维母细胞样细胞而具有收缩功能［3］.α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）是一种有收缩功能的细

5、胞骨架微丝结构［4］.McGillem［5］等曾报道:在PVR病变的增生膜中有多种细胞表达α-SMA，但针对α-SMA在增生膜中的整体表达及其与PVR病变程度的相关性研究，尚未见报道.本实验采用免疫组化技术，观察PVR的视网膜前膜中α-SMA的表达情况.　　1材料和方法　　1.1材料　　标本于1998-07/1999-11在本院眼科住院的孔源性视网膜脱离伴PVR患者14名，年龄4～63岁，病程2mo～2a.PVR分级标准参照1983年美国视网膜学会分级方法，分级为C3-D3.以上患眼行玻璃体切割术时取

6、视网膜表面增生膜，其中下膜5例，前膜9例.以上组织用40g・L-1多聚甲醛固定30min，4℃.经脱水、透明和浸蜡，制成腊块，然后制成5μm厚的切片，贴附于载玻片上.小鼠抗人的α-SMA单克隆抗体（1∶200;中国博士德公司），DAB免疫组化试剂盒（DAKO公司，丹麦），Avidin标记的TexasRed（MolecularProbes，美国）.1.2方法　　1.2.1免疫组织化学染色及免疫荧光　　切片浸入7.5mL・L-1H2O2-PBS，37℃，30min，以阻断内源性

7、过氧化物酶.正常羊血清封闭消除非特异性染色.滴加小鼠特异性抗体，在湿盒内37℃保温30min.PBS振洗3次，滴加生物素化羊抗小鼠IgG，在湿盒内37℃保温30min，免疫组织化学染色法滴加ABC复合剂，37℃保温30min.加入显色剂显色，镜下观察，水洗中止反应，苏木精复染核，脱水透明封片.免疫荧光法加入抗生物素化标记的TexasRed，37℃保温30min.缓冲甘油封片.采用人大隐静脉血管组织作为阳性对照;采用人类角膜移植后供体眼的眼后段组织，包括视网膜色素上皮细胞（RPE）、视网膜组织、脉络膜和

8、巩膜，以及不加一抗的标本作为阴性对照，与手术取材标本平行染色.　　1.2.2结果判定和分析　　免疫组织化学DAB染色法的结果:在OLMPUS显微镜（BX50）下观察，以背景清晰、棕黄色部位定位明确的细胞作为阳性细胞，在200倍视野下，计数阳性细胞比例.　　TexasRed荧光标本在BIO-RED共聚焦显微镜（MR-1024）下观察，作定量分析:任意选一视野，在相同面积下计数荧光总量.　　2结果　　阳性对照组显示均对所用的单克隆抗体呈阳性反应:DAB染色阳