病理制片技术手册

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1、病理制片技术手册第一章　病理标本的接收第二章　组织固定第三章　取材第四章　组织脱水第五章　包埋第六章　组织石蜡切片第七章　常规染色第八章　封片第九章　冷冻切片的制作第十章　常用特殊染色第十一章　常用试剂及染液的配制第一章　病理标本的接收病理标本的接收是在取材、固定组织前首先要做的第一步工作，它是临床与病理科交接的一个重要环节，它为开展病理学检查、病理档案的保存奠定了基础。标本接收程序如下。1．首先核对病理申请单与标本上的红色号码是否一致。2．核查病理申请单上写明的送检标本及数目是否与实际送检标本一致

2、。3．观察送检标本的大小及固定液比例是否合适。(1)穿刺活检及纤支镜所取的小标本，4％中性甲醛(10％中性福尔马林)固定组织的量应在6～10倍。(2)对于较大的手术切除标本，应及时切开固定；核对后将病理申请单和标本编上病理标本号。4．将病人姓名、性别、年龄、病历号、科别、临床诊断、部位、标本来源、标本例数等逐项录入电脑存储。5．作为病理资料不仅要做好计算机录入工作，还须进行文字登记，以便病理档案长期保存。第二章　组织固定一、固定的目的和意义活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会因物质代谢障碍产生一系

3、列的生物化学和组织化学改变，并导致形态学上可见的细胞器变化和细胞组织的形态改变直至腐败自溶。固定的目的就是要通过使用化学和物理的方法，尽可能地保存组织细胞离体时具有的生理和病理形态结构及生物化学和免疫化学成分。良好的固定是制作优秀病理切片的基础，也是特殊染色、组织化学、免疫组织化学和组织原位分子杂交等技术方法赖以成功的基础。因此，在病理技术工作中必须高度重视固定的质量。二、组织固定的注意事项1．及时取材：由于甲醛对组织的平均穿透速度只有0.8mm/h，因此手术切除的送检标本应及时切开进行取材，以便保

4、证重要的镜检部位能及时地得到固定。2．及时固定：完成取材的组织块应立即投入固定液以便尽可能地保存组织细胞的形态结构和抗原性。3．液量充分：一般情况下要求固定液的量应为组织体积的6～10倍。4．适度固定：现代固定的要求是，在良好保存组织细胞形态结构的同时尽可能较好地保存组织细胞的抗原性。长时间的固定会导致某些组织抗原性的逐渐丧失，因此，适时固定可以在保存细胞结构和抗原性之间取得必要的平衡。对于较大的送检标本而言，在及时切开固定的基础上，应尽可能在24h以内取材进入组织脱水程序。5．适宜温度：低温可以降

5、低固定的速度，反之可以加快固定进程。在自动组织脱水机上可以施加恒定的温度使得在有限的时间内可以完成固定过程。一般情况下应将固定温度控制在36~38℃。6．适当搅拌：在自动组织脱水机上可以通过使用搅拌和试剂循环功能使固定过程在标本与试剂充分接触的条件下完成。三、固定液的选择影响标本固定的因素很多，如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所选固定液不当，细胞内蛋白质、脂类、核酸等成分将会有不同程度地损失。固定剂最好随配随用，并注意其浓度和酸碱度。因此根据实际工作的目的

6、，选用合适的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方法及适用范围。1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7．2～7．4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。甲醛(40%)100ml无水磷酸氢二钠6.5g磷酸二氢钠4.0g蒸馏水900ml(2)乙醇固定液：使用时以80％～9

7、5％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。(3)4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定。2．混合固定液(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。甲醛(40％)100ml95％乙醇900ml(2)B5(醋酸钠一升汞一甲醛)固定液：多用于固定淋巴

8、组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。无水醋酸钠1.25g升汞6.0g蒸馏水90ml使用前加入甲醛10ml(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。饱和苦味酸水溶液(约1.22%)75ml甲醛25ml冰醋酸5ml(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。无水乙醇60ml氯仿30ml冰醋酸10ml(5)Zenk