非小细胞性肺癌病人相关细胞因子的表达论文

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1、非小细胞性肺癌病人相关细胞因子的表达论文【摘要】目的探讨非小细胞性肺癌（NSCLC）病人局部微环境中免疫反应特点及其对抗肿瘤免疫的影响。方法以5例结核性胸膜炎病人作为对照,采用地高辛末端标记的寡核苷酸探针,以原位杂交技术检测了23例NSCLC病人的新鲜胸腔积液和(或)手术切除标本淋巴细胞和肿瘤细胞中IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β1、IL-1、IL-3、IL-8、GM-CSF、TNF-α及TGF-αmRNA的表达。结果病人胸腔积液的单个核细胞及肿瘤组织中,IL-4、IL-10、TGF-α和TGF-β1m

2、RNA的表达水平明显高于IL-2、IL-12、IL-18、INF-γ；而结核性胸腔积液的单个核细胞中上述细胞因子的水平均降低,并且各细胞因子的表达水平之间没有明显的差异。结论NSCLC病人胸腔积液的单个核细胞及肿瘤组织中,Ⅱ型细胞因子和免疫抑制细胞因子mRNA的表达占主导地位,反映了肿瘤局部的免疫微环境处于抑制状态。上述结果有助于了解肿瘤逃逸的机制,并为制定NSCLC免疫治疗的方案提供了重要的实验依据。【关键词】癌非小细胞肺细胞因子类原位杂交［ABSTRACT］ObjectiveToexplorethecharacteris

3、ticsofimmuneresponsesinthemicroenvironmentofnon-smallcelllungcancer(NSCLC).MethodsInsituhybridization(ISH)RNAexpressionsofcytokinesinfreshpleuraleffusionsamplesandtumortissuesamplesof23NSCLCpatients.Fivetuberculouspleurisypatientsservedascontrols.ResultsThemRNAexpr

4、essionofIL-4,IL-10,TGF-αandTGF-β1intumortissueandmononuclearcellsfrompleuraleffusionofNSCLCpatientsRNAexpressionofIL-4,.freelplesRNAexpressionamongdifferentsamplesoftuberculouspleurisypatients.ConclusionThemRNAexpressionsoftypeⅡcytokinesandimmunosuppressivecytokine

5、spredominatedinthepleuraleffusionandtumortissueofNSCLCpatients,suggestinganimmunosuppressivemicroenvironmentaroundthetumor.Theresultscontributetoabetterunderstandingofthemechanismsoftumorescapeandprovideanimportantexperimentalbasisforeforaneffectiveimmunomodulatory

6、treatmentofNSCLCpatients.［KEY-CSF：5′-CAAACATTTCTGAGATGACTTCTACTG-3′；TNF-α：5′-AACTTTATTTCTCGCCACTGAATAGTA-3′。将13种细胞因子分为5组:IL-2、IFN-γ、IL-12和IL-18为Th1型细胞因子；IL-4和IL-10为Th2型细胞因子；TGF-β1为免疫抑制细胞因子；IL-1、IL-3、IL-8为致炎细胞因子的代表；TGF-α、TNF-α和GM-CSF。采用地高辛(DIG)寡核苷酸末端标记试剂盒标记探针,标记过程严格

7、按照产品说明书进行，标记的探针活性为1.56nmol/L。1.2.2细胞因子的原位杂交细胞涂片和组织石蜡切片的制备：整个操作过程均在无酶的环境中按常规操作进行。组织切片经脱蜡、消化和固定,并经梯度乙醇脱水后，室温干燥，于42℃先加预杂交液10~30mL在盒内预杂交2h，然后加杂交液10~30μL，在42℃杂交22h。以梯度标准枸橼酸盐水(SSC)充分洗涤后，加抗体于37℃作用2h，再以NBT-BCIP显色18h。用BufferⅢ作用5min终止显色反应.freelin，依次进行流水冲洗、梯度乙醇脱水、二甲苯透明及封片后镜检。

8、对照设置：将探针和抗体用PBS取代或将切片在37℃RNaseA(20mg/L)处理3min,分别作为细胞涂片和石蜡切片的阴性对照；以正常人活化的外周血淋巴细胞中的IL-2和INF-γmRNA作为细胞涂片的阳性对照；以慢性扁桃体炎组织中IL-2和INF-γmRNA的表达作为石蜡切片的阳性对照