局灶性脑缺血微管相关蛋白-2表达及依达拉奉保护作用探究

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1、局灶性脑缺血微管相关蛋白-2表达及依达拉奉保护作用探究缺血性脑损伤机制及其治疗一直是研究重点，其中对脑梗死神经细胞的再生、结构重建及可塑性机制等方面近几年已引起高度重视。MAP-2(微管相关蛋白-2)在神经发育、轴突再生、突触生长、结构重建等起着重要作用，是神经可塑性的重要物质基础。目前选择有效方法(康复、药物等)促进中枢神经可塑性与脑功能恢复是亟待解决的重点问题之一。�本研究采用MCAO局灶性脑缺血模型，观察大鼠不同时间可塑性物质基础MAP-2表达动态变化及自由基清除剂依达拉奉对其表达和神经功能的影响，进一步从神经可

2、塑性角度探讨局灶性脑缺血MAP-2的表达规律及依达拉奉的保护作用机制，为依达拉奉治疗缺血性脑血管病提供更深层次的理论依据。�1资料和方法�1．1实验动物和分组健康雄性Wistar大鼠(吉林大学实验动物中心提供)54只，体质量（200±50）g，鼠龄3~4个月。随机分为3组，假手术对照组，盐水-缺血组，依达拉奉缺血组。缺血组缺血时间分别为1、3、7、14d。�1．2给予途径、剂量依达拉奉(由昆明积大制药有限公司提供)，按36mg/kg/d，腹腔注射，生理盐水(由长春豪邦制药公司生产)，按与药物相同体积注射。�1．3动物模

3、型制备采用局灶性脑缺血模型，结扎颈内动脉，制备左侧大脑中动脉供血区永久性局灶性缺血模型。�1．4切片标本制备用于普通病理及免疫组化的切片常规石蜡染色。�1．5免疫组化染色采用SP法，MAP-2试剂盒为福州迈新生物技术开发公司产品。用PBS代替一抗做阴性对照，用已证实MAP-2阳性片做阳性对照。MAP-2以胞浆和树突棕黄色为阳性。�1．6图像分析应用彩色病理图像分析系统对切片进行图像分析。免疫组化切片选取观察部位，每个区域选取3个200×镜下视野，测定MAP-2阳性细胞数。�1．7统计学方法结果以(x±s)表示，均数显著

4、性采用t检验，统计学处理应用SPSS12．0统计软件。�2结果�2．1病理形态学变化及依达拉奉对其的影响假手术组：神经元分布正常。盐水-缺血组：缺血1d：中心区组织明显稀疏，神经元大部分脱失，残存神经元变性、深染，细胞周围空泡变，周围区神经元可见明显缺血改变，散在嗜伊红细胞出现，梗死界线清楚，并可见胶质细胞浸润。缺血3d，中心区淡染，脑组织稀疏明显重于16d，神经元脱失更加，细胞周围大空泡变，神经元变性，核固缩、碎裂、溶解，失去完整结构，有大量细胞残骸，周边区范围缩小。缺血7d、14d：梗死灶边缘境界清楚，交界区神经元

5、变形明显，形成三角形或不规则形，部分神经元失去正常的完整结构，顶树突延长，可见神经元脱失及明显胶质细胞增生、浸润。依达拉奉缺血组：梗死周边区缺血范围及脑水肿程度均较盐水-缺血组减轻，正常神经元数增多。�2．2MAP-2表达变化及依达拉奉对其的影响见表1。�3讨论�近年研究表明，MAP-2在神经元发育、分化、可塑性方面起主导作用，MAP-2主要存在于树突和胞体，是细胞骨架结构蛋白，对脑缺血非常敏感，常作为缺血诱导脑缺血损伤的标记物，也有实验观察到MAP-2可调节突触可塑性。研究显示中枢神经系统具有高度的可塑性，主要为神经

6、元结构和功能的适应性变化，并已证实可塑性存在于神经元发育早期和成年后突触构成时期，与树突及突触的形态学变化有关，并受MAP-2磷酸化状态的调节，提示细胞骨架蛋白在神经可塑性过程中有重要作用[1]。�6研究表明，脑缺血后梗死中心区受损神经元MAP-2表达丧失，而相当完整的神经元和缺血周边区MAP-2表达选择性升高，此种改变与缺血后的神经元恢复相对应[2]；MAP-2减少或丧失可以严重或致命损伤神经元，脑缺血数分钟就会引起细胞支架的紊乱，导致蛋白成分不可逆变性，沙鼠颈总动脉闭塞3min，同侧海马CA1区MAP-2明显减少，

7、随缺血时间延长，MAP-2丢失，而且波及整个海马及其他部位[3]，Kudo等发现脑血流减少25%持续6周，在脑不同部位MAP-2选择性减少；研究显示尽管梗死中心区MAP-2免疫反应明显增加[4]。脑缺血损伤涉及细胞骨架蛋白的降解，MAP-2的改变可能在这一过程中起着重要作用，MAP-2对兴奋性氨基酸、生长因子等反应敏感，是细胞内信号传递的重要环节，参与神经元的生长和损伤后修复过程。�本实验免疫组化结果显示，缺血1~14d可见明显缺陷中心区表达淡染，而周边区表达明显增强，进一步说明MAP-2对不同缺血程度的敏感性不同。在

8、缺血1、3d，周边区表达增强明显，7、14d表达增强并趋于稳定，相比无明显差异，提示MAP-2仍为早期缺血改变为主的缺血损伤标志性蛋白。�6急性脑梗死后神经功能缺损可有不同意程度的自行改善，目前认为残存脑组织的可塑性起关键作用。依达拉奉是一种新型的自由基清除剂已被用于急性缺血性脑血管病的治疗，其抗自由基作用机制目前研究较多，Jin