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1、复叶槭叶片和茎段诱导愈伤组织的影响因素?生物技术?北方园艺2006(4):168～170复叶槭叶片和茎段诱导愈伤组织的影响因素张彦妮,卓丽环.(1.东北林业大学园林学院哈尔滨,150040l2.上海农林职业技术学院,201600)摘要:研究了影响复叶槭叶片和茎段愈伤组织诱导的因素.结果表明,放置方式与茎段和叶片的出愈率关系不大,但对茎段愈伤组织的大小,形态特性和部位与生根率有关.叶片的出愈率与碳源有关,在白沙糖中最高,蔗糖次之,但在蔗糖中表现最佳.黑暗处理时间的长短也影响叶片的脱分化能力.叶片和茎段的脱分化能力与蔗糖浓度有关,在30g/L时出愈率最大.外植体出愈率的高低和愈伤组织的形态
2、与激素种类或浓度有关.高浓度的2,4一D将导致水渍状或玻璃化的愈伤组织产生,低浓度的2,4一D形成瘤状愈伤组织.随着6一BA浓度的增加,叶片的生根率降低,茎段愈伤组织出现的时间提前,愈伤组织生长的较快,但当6一BA浓度到达2.0mg/L时,愈伤组织出现时间推迟,生长速度下降,褐化速度加快.关键词:叶片;茎段I愈伤组织中图分类号:$792.35.04文献标识码:B文章编号:1001—0009(2006)04--0168一O3复叶械(AcernegundoL.)亦称糖械,羽叶械,白蜡械,属槭树科,械树属.广泛分布于美国及加拿大.该树种喜光,耐早,耐寒,耐烟尘,根萌蘖性强,生长较快,对土壤要
3、求不严;树形挺拔秀美,入秋叶色金黄,具有很高的观赏价值及实用价值,是稀有优良的园林绿化树种,可作庭院树,行道树及防护林树种.但目前的栽培苗木供不应求,一般情况下,主要采用常规的扦插和播种繁殖方法,扦插繁殖系数低,播种繁殖的后代易产生性状分离,而组织培养作为重要的快速繁殖技术可以弥补二者的缺点.其中愈伤组织途径是进行组织培养快速繁殖的一条重要途径.现以复叶械叶片和茎段为研究对象,通过比较不同处理方法以及不同浓度的2,4一D,6一BA等因素对复叶械叶片和茎段愈伤组织诱导的效果.从而为通过愈伤组织途径建立复叶械组织培养再生体系奠定基础.1材料与方法1.1试验材料试验所用材料来源于复叶械的实生
4、苗和复叶械组培苗.1.2试验方法1.z.1复叶械实生苗茎段的消毒将来自35d左右的复叶械实生苗茎段,在加有1～2滴Tween一2O和1的NaClO溶液中进行表面消毒,20d后进行污染率,白化率统计,从而筛选茎段的最佳消毒时间.1.2.2不同放置方式诱导茎段,叶片的愈伤组织将茎段平放或竖放(分为正插和倒插两种),叶片近轴面或远轴面分别放于MS+0.01rag/L2,4一D+1.0mg/LBA的培养基上,2od后观察记录,比较放置方式对茎段和叶片愈伤组织诱导的影响.1.2.3不同碳源诱导叶片愈伤组织以组培苗的叶片为外植体,以MS+0.7mg/LBA+0.01mg/L2,4一D为培养基,分别
5、以葡萄糖,白沙糖,蔗糖为碳源(浓度均为3Og/L),20d后观察记录,比较不同碳源对叶片愈伤组织的诱导效果.1.2.4不同黑暗处理时问诱导叶片愈伤组织以组培苗的叶片为外植体,将其接种到MS+0.7mg/LBA+0.01mg/L2,4一D培养基上,然后放于培养室进行不同时间的黑暗处理(O,7d和15d),20d后进行观察记录,比较黑收稿日期tz006一O3一zO168暗处理时问对叶片愈伤组织的诱导效果.1.2.5不同蔗糖浓度诱导叶片,茎段愈伤组织以组培苗的叶片,茎段为外植体,以MS+0.7mg/LBA+0.01mg/L2,4一D为培养基,分别以10g/L,20g/L,30g/L,40g/
6、L蔗糖为糖源,比较蔗糖浓度对叶片,茎段愈伤组织的诱导效果,20d后进行统计.1.2.62,4一D和6一BA诱导叶片和茎段愈伤组织诱导愈伤组织培养基为:MS+O～1mg/L2,4一D;MS+0.01～2.5mg/L6一BAI所有培养基均用1NaOH调节pH为5.6～6.0,除了比较不同碳源和蔗糖浓度对外植体的分化影响外,均选用30g/L的蔗糖为碳源,琼脂浓度为7.6g/L.然后在121℃条件下高压灭菌13rain.1.2.7不同指标的计算方法每隔一周观察一次,20~30d统计出愈率,污染率,生根率等.计算公式如下:出愈率一[产生愈伤组织的外植体总数/(接种外植体总数一污染外植体总数)]×
7、100污染率一[未污染的外植体总数/接种外植体总数]×100生根率一[生根外植体的总数/(接种外植体总数一污染外植体总数)]×100外植体接种后,除进行黑暗实验的比较外,均放入培养室内进行培养,培养室温度为25士2℃,光/暗周期为14h/10h,光照强度250o～3500Lx.2结果与分析2.1茎段消毒时间的确定表1茎段不同消毒时间的比较从表1看出,茎段的放置方式影响其消毒效果.随着茎段消毒时间的延长,污染率下降.茎段在消毒时问超过10rain
