流式细胞仪在医学检验中应用

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1、流式细胞仪在医学检验中应用流式细胞仪是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器［1］。概括来讲，流式细胞术就是对于处在快速直线流动中的细胞或生物颗粒进行多参数的快速的定量分析和分选的技术。从开始设想到第一台仪器的问世，科技工作者进行了不懈的努力。随着各相关技术的迅速发展，流式细胞术已经成为日益完善的细胞分析和分选工具。目前，流式细胞仪已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域［2］。我科于2010年6月引进了一台BD公司的FACSCalib

2、ur流式细胞仪，现已投入到临床的应用中，为临床诊断和科研提供了强有力的手段。现将它的原理及临床应用介绍如下：7流式细胞分析(flowcytometryFCM),又称流式细胞术。其原理是将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱，后者与入射的激光束垂直相交，液柱中的细胞被激光激发产生荧光。仪器中一系列光学系统(透镜、光阑、滤片、和检测器等)收集荧光、光散射、光吸收、或细胞电阻抗等信号。计算机系统进行收集、储存，显示并分析被测定的各种信号，对各种指标作出统计分析［3］。1流

3、式细胞术在肿瘤学上的应用利用FCM进行细胞周期分析、DNA倍体分析、定量分析检测细胞增殖标志物、细胞表面标志、癌基因蛋白产物、耐药蛋白、细胞凋亡等，从而获得组织形态学方法难以得到的信息，可为肿瘤的临床诊断、治疗和预防提供帮助。对肿瘤细胞DNA含量作定量分析，解析细胞周期，通过细胞异倍体测定预测各种肿瘤的预后，并能在化疗中对药物的选择和放疗中强度、时间的决定等起指导作用。解析抗癌药物作用机制，对癌症进行早期诊断及鉴别良恶性有一定参考价值。此外，由于FCM对凋亡、周期蛋白、癌基因及抗癌基因的研究也发挥着重要作用，近年来引起肿瘤研究者的极大关注，已广泛应用于肿瘤基础和临

4、床研究中，为肿瘤诊断、疗效评价和预后预测提供重要参考指标。另外，传统的细胞形态学至今仍是诊断肿瘤的一种重要的手段。多年来，细胞学工作者就设想使肿瘤细胞学诊断自动化，流式细胞术的问世，使细胞学检查自动化的宿愿如愿以偿，并已广泛应用于肿瘤临床细胞学的诊断研究。7大量的临床应用表明，流式细胞术对肿瘤细胞学的诊断正确率已达常规细胞学诊断水平。肿瘤细胞对化疗药物的耐受性是肿瘤治疗的主要障碍。肿瘤细胞的耐药性可分为原发耐药和继发耐药，前者在化疗前就存在于肿瘤细胞中，与用药无关，后者是由化疗药物诱导产生的，即在药物使用前对药物敏感，而在用药之后产生耐药。继发耐药根据耐药谱的不同

5、又可分为原药耐药(PDR)和多药耐药(MDR)。MDR相关蛋白包括P糖蛋白、多药耐药相关蛋白等。它们都属于ATP酶活性转运蛋白，均是通过药物外排泵的作用降低细胞中药物的聚集。因此应用FCM检测肿瘤细胞的多药耐药相关蛋白的表达水平，对监测临床肿瘤化疗效果及药物的选择有一定意义。2流式细胞术在临床细胞免疫中的应用2.1淋巴细胞亚群的测定淋巴细胞分为T淋巴细胞(CD3)、B淋巴细胞(CD19)、NK淋巴细胞(CD16+56)三大群；T淋巴细胞又分为T辅助细胞/诱导细胞(CD4)、T抑制和细胞毒细胞(CD8)。2.2临床应用7总的T淋巴细胞和B淋巴细胞百分数可以用来判断某

6、些免疫缺陷和自身免疫性疾病。了解CD4+和CD8+淋巴细胞的百分数有助于监测患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反应的患者的免疫状态。正常人淋巴细胞CD4+/CD8+比值大约为2/1，比值升高表明机体免疫机能亢进，见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血等。比值降低表明机体免疫机能下降，如艾滋病、病毒感染、肿瘤患者、活动性肝硬化、AA等。当人体感染HIV后，CD4+T淋巴细胞的百分比和数量减低，可辅助HIV监控治疗；SARS患者治疗前后T淋巴细胞数量是不同的；可监测肾移植后患者的肾排斥反应，CD4+/CD8+细胞比值持续减低，表明移植后感染

7、。若比值<0.2时应停用免疫抑制剂，以免发生感染而导致移植失败。比值突然增加表明有排斥。自然杀伤(NK)淋巴细胞能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用。3流式细胞术在血液病中的应用流式细胞术对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值［4］。白血病系列分化抗原T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO(髓过氧化物酶)。红白血病：GlyA(血型糖蛋白A)。巨核细胞白血病：CD41、CD

8、42、CD