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时间:2018-07-10
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1、卵巢癌患者exosomes来源初探论文李奇灵孙阳珍于月成方静张媛丽辛晓燕【关键词】exosomes;腹水;卵巢肿瘤;细胞培养技术parisonofextractionmethodsofexosomesfrompatientsethodsofexosomesfromtissueorascitesofanadvancedovariancancerpatient,todetecttheexpressionofexosomesoftes.METHODS:Thetissueofovariancancerthesamepatient.Theexosom
2、esthecellculturesupernatantandtheascitesandinedunderelectronmicroscope.HSP70,HSP90,MHCclassⅠmoleculeandMHCclassⅡmoleculeonexosomesesethod.RESULTS:ThetimeforthecentrifugationofascitesescouldbeobtainedfromallofthesupernatantsandtheascitestheascitesesexpressedMHCclassⅠmolecul
3、e,HSP70andHSP90exceptMHCclassⅡmolecule.Theproteinconcentrationofexosomesintheascitesesfortheovariancancerpatientalignanteffusionescanbeextractedfromovariancancertissueforthepatientses;ascites;ovarianneoplasms;cellculturetechniques【摘要】目的:同一晚期卵巢癌患者,对组织来源和腹水来源的exosomes进行方法和数量
4、的比较,探讨获得卵巢癌患者exosomes的最佳途径.方法:收集晚期卵巢癌患者卵巢癌组织,分离癌细胞进行培养,留上清液,取同一患者的腹水,通过超速离心和超滤等方法提取上清液及腹水中的exosomes,电镜下检测;HCⅠ类分子和MHCⅡ类分子的表达;用BCA蛋白测定法测定exosomes的蛋白浓度,计算蛋白总含量.结果:腹水离心时间比上清液离心时间长,所有细胞培养上清液和癌细胞阳性的腹水均能分离出exosomes.freeles;两种来源的exosomes共同表达MHCⅠ类分子、HSP70和HSP90,均不表达MHCⅡ类分子,腹水中分离出来的
5、exosomes蛋白含量比细胞培养上清液的含量高(P0.05).结论:腹水中癌细胞阳性的患者,腹水是exosomes的比较理想的来源;无腹水或腹水中癌细胞阴性的患者,exosomes可来源于卵巢癌组织.【关键词】exosomes;腹水;卵巢肿瘤;细胞培养技术0引言exosomes是许多种细胞都能分泌的直径30~90nm的小囊泡,由蛋白质和脂质组成的亚细胞器.近年来,癌症患者的肿瘤细胞和树突状细胞(dendriticcell,DC)分泌的exosomes,由于它携带所分泌细胞的一些抗原信息,被作为肿瘤特异性抗原的来源,用于恶性肿瘤免疫治疗[1
6、-2]的研究.由DC分泌的exosomes已经在黑色素瘤和非小细胞肺癌进入了临床Ⅰ期试验[3],但exosomes在卵巢癌中的研究进展较慢.本研究我们对晚期卵巢癌患者组织来源和腹水来源的exosomes分离方法、获得量比较,探讨卵巢癌患者最佳exosomes来源途径.1对象和方法1.1对象选择200501/200512在西安交通大学第一附属医院妇产科住院的原发性卵巢癌患者15例,年龄(53±6)岁.临床分期Ⅲ~Ⅳ期,均伴有腹水,腹水中查出癌细胞者10例(10/15),腹水中癌细胞阴性者5例(5/15).取标本前未经化疗,均为第一次剖腹探查,
7、术中无菌操作留取卵巢癌组织,术前或术中留取腹水.术后病理诊断,浆液性囊腺癌9例,黏液性囊腺癌6例.99.93%重水购自Sigma公司;RPMI1640培养液购自Gibco公司;Centriplus离心超滤管(100KDa)、AmiconUltra高回收率高流速切向流超滤离心管(100KDa)购自美国Millipore公司;兔抗人热休克蛋白(HSP70)多克隆抗体、兔抗人HSP90多克隆抗体购自武汉博士德生物工程公司;鼠抗人MHCⅠ类分子(HLAABC)mAb、鼠抗人MHCⅡ类分子(HLADR)mAb购自华美公司;I1640全培养液中,于37
8、℃含50mL/LCO2细胞培养箱中常规培养,隔日传代,.freeles的获得分别取腹水和细胞培养上清液,以300g离心5min,取上清液;以800g离心30min,去沉淀;再以1
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