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1、褪黑素增强HeLa细胞的抗氧化作用【摘要】目的探讨褪黑素在抑制HeLa细胞增殖剂量下对抗氧化作用的影响。方法MTT法测定褪黑素对HeLa细胞增殖的抑制作用;分光光度法检测褪黑素作用下总抗氧化能力(T-AOC),测定谷胱甘肽(GSH)及总超氧化物歧化酶(T-SOD)的含量。结果褪黑素对HeLa细胞的抑制作用存在明显的浓度及时间依赖性;褪黑素作用72h抑制HeLa细胞增殖的IC50为0.27mmol/L;褪黑素剂量依赖性增强T-AOC;也增加GSH及T-SOD的含量。结论褪黑素在抑制HeLa细胞增殖剂量下可增强抗氧化作用。【关键词】褪黑素;HeLa细胞;细
2、胞增殖;分光光度法,紫外线;氧化还原;肿瘤细胞,培养的ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheantioxidanteffectsofmelatoninonHeLacellsproliferateactivities.MethodsMTTassayelatoninonHeLacells.Ultraviolet-visiblespectrophotometerutase(T-SOD).ResultsTheanti-proliferateactivitiesofmelatoninonHeLacellse-dependentand
3、adose-dependentmanner.TheIC50ofmelatoninonHeLacellsmol/L.MelatoninenhancedtheT-AOCelatonin;HeLacells;cellproliferation;spectrophotometry,ultraviolet;oxidationreduction;tumorcells,cultured褪黑素(melatonin,MT)是一种主要由松果腺细胞合成和分泌的吲哚类激素,已有调节睡眠的MT制剂应用于市场［1］。MT作为体内的天然抑瘤因素,其抗肿瘤机制可能与直接抑制肿瘤增殖、
4、免疫增强作用及抗氧化作用有关［2-4］。MT毒副作用相对小,且可减少其他抗肿瘤药的毒性［5-6］,已成为研究的热点之一。本课题组对褪黑素的体内外抗肿瘤作用研究已有报道［7-10］。笔者探讨褪黑素在抑制HeLa细胞增殖剂量下对抗氧化作用的影响。1材料与方法1.1材料1.1.1主要试剂与设备MT(美国Sigma公司),临用时先用无水乙醇溶解,再用含10%小牛血清的RPMI1640培养液稀释成所需的浓度,无水乙醇的终浓度≤1%。RPMI1640培养液(美国Gibco公司)。胰蛋白酶(美国Difco公司，进口分装)。小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司),
5、56℃灭活30min后使用。四甲基偶氮唑盐(MTT,美国Sigma公司)。总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。紫外-可见分光光度计(752型,上海精科实业有限公司)。1.1.2细胞株及培养条件人宫颈癌HeLa细胞(上海中国科学院细胞库),用含10％小牛血清及800U/mL庆大霉素的RPMI1640培养液培养,经0.25%胰蛋白酶消化传代,取对数生长期细胞用于实验。1.2方法1.2.1MTT法观察褪黑素对细胞增殖的影响取对数生长期的HeLa细胞,以0.25%胰蛋白酶充分消化后
6、,用培养液稀释使细胞密度为(1.5～2.5)×104mL-1后接种于96孔培养板中,每孔180μL。实验组分为低、中、高及极高剂量组(终浓度分别为0.03,0.17,0.86及4.31mmol/L),各组每孔分别加入等体积相应浓度的MT20μL,对照组加入等体积培养液,含与最高浓度药液等体积的无水乙醇,无水乙醇最高终浓度≤1%。每组设4个复孔,培养1～5d。药液作用1d后开始,每天同一时间取其中一96孔板,每孔加入5mg/mLMTT20μL,在培养箱中继续孵育4h后,弃净上清液,每孔加DMSO150μL,空白对照孔加入DMSO150μL。振荡10min
7、;用酶标仪测定光密度［D(492nm)］,计算细胞生长抑制率,Bliss法计算IC50。1.2.2紫外-可见分光光度法检测褪黑素对HeLa细胞T-AOC及T-SOD、GSH含量的影响取对数生长期的HeLa细胞,以0.25%胰蛋白酶充分消化后,用培养液稀释至细胞密度为(6～10)×105mL-1后接种于6孔培养板中,每孔2mL。实验组分为低、中、高及／或极高剂量组(终浓度分别为0.17,0.86,4.31及/或21.6mmol/L)，每组设1块6孔培养板,各组每孔分别加入等体积相应浓度的MT20μL,对照组加入等体积培养液,含与最高浓度药液等体积的无水乙
8、醇,无水乙醇最高终浓度≤1%。分别培养24,48及72h,重复3次。1.2.2.1T-AOC测
