细胞周期素e在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

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1、细胞周期素E在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义【摘要】目的：探讨细胞周期素E(cyclinE)在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义。方法：收集武汉大学人民医院及武汉大学中南医院存档甲状腺乳头状癌蜡块40例，另取5例瘤旁组织为对照组。将以上组织进行免疫组织化学实验,检测cyclinE在各组中的表达,利用HPIAS?2000图像分析系统测定cyclinE在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：cyclinE在甲状腺乳头状癌组织中呈高表达,而在瘤旁组织中呈低表达。图像分析结果显示，甲状腺乳头状癌组与瘤旁组织之间cyclinE的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P&l

2、t;0.05)。结论：cyclinE在甲状腺乳头状癌的生物学行为中起了重要作用,cyclinE的高表达可做为甲状腺乳头状癌的一个新的预后指标。【关键词】细胞周期素E(cyclinE)甲状腺乳头状癌免疫组织化学　　甲状腺是人体重要的内分泌腺，它在机体新陈代谢方面具有重要地位，是内分泌系统中发病率最高的器官。甲状腺癌是常见的内分泌系统恶性肿瘤之一，约占全身恶性肿瘤的1.5%，男女比约为1:2.5～3。与一般恶性肿瘤好发于老年人不同，甲状腺癌多发于青壮年，平均年龄约40岁，统计显示近年来甲状腺癌的发病率呈增高趋势［1，2］。分化型甲状腺癌占所有甲状腺癌的90%,包括乳头状甲状腺癌(P

3、TC)和滤泡状甲状腺癌(FTC)。甲状腺未分化癌较为少见,但恶性程度高、预后差。　　细胞周期素E(cyclinE)是细胞周期重要的调节因子,cyclinE与特定的细胞周期依赖性激酶(cyclindependentkinases,CDKs)构成复合体,可以使底物磷酸化,启动DNA的合成［3，4］,CDK抑制蛋白(cyclin?dependentkinaseinhibitorproteins,CKIs)能够抑制cyclinE的活性。不同的物质可以通过与CKIs之间直接或间接的相互作用影响cyclinE的表达,这些相互作用对阐明肿瘤发生的机制是非常重要的,而且可以为大量常见的肿瘤提供

4、预后的信息［5］。　　但有关cyclinE在甲状腺乳头状癌的研究报道尚少。我们应用免疫组织化学方法观察了cyclinE在甲状腺乳头状癌组织中的表达,并采用图像分析系统测定cyclinE在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率，旨在探讨cyclinE在甲状腺乳头状癌组织中的生物学行为及临床意义。　　1材料与方法　　1.1材料来源及分组收集武汉大学人民医院及武汉大学中南医院存档甲状腺乳头状癌蜡块40例。其中，男12例,女28例，年龄23～68岁。甲状腺癌组患者术前均未做放、化疗。另取5例瘤旁组织为对照组。　　1.2主要试剂　　浓缩型鼠抗人CyclinE单克隆抗体(北京中山生物技

5、术有限公司)；超敏即用型S?P通用型免疫组织化学试剂盒(北京中山生物技术有限公司)；显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。　　1.3主要仪器　　Y，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；②3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min；③细胞周期素D1采用微波抗原修复（3档，10min），PBS洗4×5min；④正常羊血清37℃孵育10min以减少非特异性反应；⑤一抗37℃孵育1h，PBS洗4×5min；⑥生物素标记的二抗，37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑦链霉菌抗生物素蛋白?过氧化物酶复合物37℃孵育10min，PBS洗4×5mi

6、n；⑧DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应；⑨苏木精复染，脱水，透明，封片。　　用PBS代替一抗作为阴性对照。　　1.6免疫组织化学结果判断细胞周期素E以胞核或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。采用HPIAS?2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对细胞周期素E的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（×400），测定每个视野下细胞周期素E的阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值（阳性面积率＝单位

7、面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100％）。1.7统计学处理　　对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNK?q检验，检验水准α为0.05。(责任编辑：admin)　　2结果　　2.1HE染色癌旁组织中可见甲状腺滤泡呈圆形或椭圆形，滤泡上皮为单层立方或单层柱状，滤泡腔内可见红色胶体，滤泡间可见较多的结缔组织和丰富的毛细血管，结构较清晰。甲状腺乳头状癌组织内可见分化良好的柱状上皮呈乳头状突起呈分支状，中心有纤维血管轴心，表面被覆瘤细胞。瘤细胞核