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1、a-L-岩藻糖苷酶测定及临床应用体会原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,死亡率高,在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃癌、食道癌而居第三位。临床上原发性肝癌一般测定甲胎蛋白(AFP)结合影像学检查进行诊断,但早期由于缺乏典型的临床症状,很难确认。近年来,a-L-岩藻糖苷酶(AFU)在原发性肝癌早期诊断中的作用正引起人们广泛关注[1]。我院自2005年开展AFU检测,在临床上得到了有效应用.现将AFU的检测和应用体会总结如下。�1AFU的基本特性5AFU是一种溶酶体酸性水解酶,化学本质是一种糖蛋白。分类名为α-L-岩藻糖
2、苷岩藻糖水解酶(EC3.2.1.51)。血清中AFU的分子量为270KD～390KD。基本生理功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷的分解代谢。广泛分布于人体内的各种组织、细胞及体液中,如肝、脑、肾、胰、胎盘组织;细胞培养液中的成纤维细胞、白细胞以及血清、尿液、唾液、泪液和垂体液中均含此酶。AFU在人体内呈多形性,有三型同工酶,即AFU1、AFU1-2、AFU2,是由1个位于第1号染色体短臂(1,P34)上基因位点的2个等位基因所表达,高活性的AFU1由基因FU1所表达,低活性的AFU2由基因FU2
3、所决定,而AFU1-2则由FU1-FU2两个基因的杂合子所决定。以往AFU主要用于遗传性AFU缺乏引起的岩藻糖贮积病的诊断,并借此与其他遗传性粘多糖贮积病相鉴别。1980年Deugnier[2]首先发现肝癌患者血清AFU活性明显高于正常人,从而为诊断原发性肝癌提供了新的指标。�2AFU的实验室检测。血清AFU测定主要有荧光法和比色法2.1荧光法。AFU可水解4-甲基伞形酮a-L-岩藻呲喃糖苷,释放出4-甲基伞形酮,用碱性缓冲液终止反应并使产物呈现荧光。在360nm激发波长和400nm发射波长下检测荧光强度。对
4、照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求得酶活性。此法敏感性高,最低检出限0.06U/L。既适用于血清,也适用于活检组织、细胞、脑脊液和泪液等量小的生物样本,以及AFU活性低的标本。用等聚焦电泳分离AFU同工酶时,也多利用此荧光底物显示酶区带。2.25比色法。以4-硝基苯a-L-岩藻呲喃糖苷为底物,本法简便,设备要求不高,国内外广泛采用。经过多次改良后,目前的商品试剂盒有效减少了样品中其它物质对测定的干扰,增加了反应速度。尤其利用4-NP摩尔吸光度计算酶活性,取代传统的标准曲线,既减化了操作,又利于自动化分析
5、。最新实验用氯化对硝基苯a-L-岩藻呲喃糖苷做AFU的底物,可以使酶反应的最适合条件和显色环境相一致,不仅大大提高了反应灵敏度和精密度,而且大大提高了反应的抗干扰性,基本解决了溶血、黄疸、脂血的基质效应问题,是目前AFU测定方法学的重大突破[3]。�3AFU的临床应用及体会3.1正常组织糖苷酶的释放率变化很小(孕妇除外),从而使血清糖苷酶维持在一定范围内。血清AFU升高主要见于原发性肝癌,阳性率为81.2%,与AFP联合检测,可提高肝癌的诊断阳性率达93.1%。AFU活性高低与肝癌的大小和AFP浓度无明显相关
6、。有些肝癌体积很小,但AFU活性明显升高,因此可作为原发性肝癌的早期诊断参考指标。肝癌术后观察血清AFU的水平,也可用于监测疗效。肺癌、乳腺癌、子宫癌以及肝硬化、糖尿病也可见升高。妊娠期间,AFU升高,分娩后血清AFU迅速下降。3.2原发性肝癌病人的AFU活性显著高于继发性肝癌、胆管细胞癌、恶性血管内皮细胞瘤、恶性间皮细胞瘤、肝硬化、先天性肝囊肿和其它良性5肝占位性病变。一些原发性肝癌病人AFU活性显著升高,而肝功能多属正常,即无白球蛋白或谷丙转氨酶的明显改变,说明原发性肝癌时AFU的升高与肝功能及肝细胞坏死
7、无明显关联,而是由癌肿本身合成增加及降解减慢所致。肝癌患者血清AFU升高的机制可能是:①肝癌细胞合成酶增加并大量释放入血。②血清AFU破坏减少,正常时肝枯否细胞从血清中清除AFU,肝癌时由于细胞免疫功能低下或其他原因使枯否细胞清除AFU的能力下降而表现为酶活性升高。③含岩藻糖的糖蛋白和糖脂的代谢紊乱。3.3最新研究发现,AFU测定在肾病、糖尿病、白血病等疾病中同样具有相当积极的作用。邵妙伟的研究结果中显示在糖尿病患者糖代谢失控的情况下AFU也可明显升高,而糖代谢在控时往往与正常对照无明显差异。因此,在临床诊断
8、治疗中,AFU可作为糖尿病患者糖代谢控制的又一良好观察指标[4]。但就糖尿病糖代谢失控人群AFU升高的具体病理原因,目前还没有明确的解释,可能与糖代谢紊乱引起血管病变有关,血管病变导致组织器官(肝、肾等)的病变,最终致使血液AFU升高。综上所述,多年来AFP作为原发性肝癌的诊断指标,虽有较高特异性和诊断价值,但仍有20%～30%的患者AFP阴性造成漏诊。AFU具有较高敏感性和特异性,可作为原发性肝癌
