紫草多糖的体外抗氧化活性研究_药学论文

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1、紫草多糖的体外抗氧化活性研究_药学论文紫草多糖的体外抗氧化活性研究_药学论文作者:刘婷,陈韩飞,赵文彬,李德芳,王振华,郑秋生,陈韩英【摘要】目的研究紫草多糖的体外抗氧化作用。方法通过·OH、DPPH·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血反应体系,检测紫草多糖的抗氧化能力。均采用比色法测定。结果紫草多糖对·OH、DPPH·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血均有清除或抑制作用。结论紫草多糖在体外具有抗氧化作用。【关键词】紫草;多糖;抗氧化新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle)Johns为紫草科软紫草属植物,又名新疆

2、软紫草,收载于《中国药典》,是我国常用的中药[1],多为草本,以根入药,因其根皮暗紫色,故名“紫草”。该药具有凉血活血、解毒透疹之功效。已有研究表明紫草具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎及镇痛、抗肿瘤及免疫调节等生理活性[2]。现代医学证明,心脑血管疾病、衰老及肿瘤疾病的发生和发展与体内的活性氧自由基有密切关系,而许多抗氧化成分可以清除这些自由基,阻断由它们引发的体内脂质过氧化,能够预防上述疾病的发生发展近年来,人们发现天然药物是极有潜力的抗氧化剂资源,从中寻找新的抗氧化剂是现代医药和保健品行业的发展方向。多糖是继黄酮类、多酚类、皂

3、苷类及鞣质类之后从天然植物中发现的又一类抗氧化活性成分[3]。许多植物多糖对各种活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)具有清除作用,能减少脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的生成量,提高抗氧化酶活性(超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx等),表现出多种途经的抗氧化作用[4,5]。研究多糖及其衍生物的抗氧化活性,对于开发出更多更好的天然抗氧化剂,逐步取代存在一定毒性、致畸性和潜在致癌性的化学合成抗氧化剂,具有重要的现实意义[6]。本实验研究紫草多糖的体外抗氧化活性。  1材料与仪器  1.1药材与

4、试剂紫草,购自新疆阿克苏地区,干燥粉碎过筛备用;1,1二苯基2苦肼基自由基(Sigma公司);Tris(北京拜尔迪生物公司);2硫代巴比妥酸(上海科丰化学试剂有限公司);焦性没食子酸(天津市富宇精细化工有限公司);其余试剂均为分析纯。  1.2仪器多功能酶标仪(Thermo3001VARIOSKANFLASH);AR2140型万分之一电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司制造);DL360超声波清洗机(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)。  2方法  2.1紫草多糖的制备称取100g紫草粗粉用600ml的石油醚(30~60

5、℃)脱脂3次,晾干,然后加入1000ml蒸馏水提取数小时,趁热过滤,重复3次。合并水提液并浓缩至原体积的1/4,加入3倍量无水乙醇,静置过夜后抽滤。将沉淀用无水乙醇、丙酮和乙醚依次洗涤,真空干燥,即得粗紫草多糖。  2.2多糖对·OH的清除作用[7]  空白组:30μl0.75mmol/L邻二氮菲溶液中加入60μl0.15mol/L的PBS(pH=7.4),加入30μl的蒸馏水,充分混匀后,加入30μl0.75mmol/L的硫酸亚铁,混匀后,再加入30μl的1%的H2O2混匀。37℃的水浴中60min后,在536nm处,测定吸光

6、度为A1;空白对照组:以30μl的蒸馏水代替H2O2重复上述操作,在536nm处,测定吸光度为A2;样品组:以30μl的样品代替30μl的蒸馏水重复空白组操作,在536nm处,测定吸光度为A3;样品对照组:60μl0.15mol/L的PBS中加30μl的样品,充分混匀后,加入90μl的蒸馏水,在536nm处测定吸光度为A4;空白参比组:60μl0.15mol/L的PBS加入120μl的蒸馏水,在536nm处测定吸光度为A5。清除率(%)=[(A3A4A1+A5)/(A2A1)]×100%  2.3多糖对DPPH·的清除作用

7、[8]  向100μlDPPH·乙醇溶液(浓度为0.2mmol/L)中加入100μl紫草多糖溶液。涡旋振荡器混匀,室温,避光放置30min后,在517nm处测定吸光度,平行测定3次,并以相同浓度的维生素C作为阳性对照,计算清除率。  清除率(%)=[A0(A1A2)]/A0×100%式中:A0为DPPH·溶液100μl+无水乙醇100μl的吸光度;A1为DPPH·溶液100μl+样品溶液100μl的吸光度;A2为样品溶液100μl+无水乙醇100μl的吸光度。  2.4多糖对超氧阴离子的清除作用[9]  取浓度为0.05mo

8、l/L的TrisHCl(pH=8.2)缓冲液100μl,25℃预热20min,加入50μl不同浓度的紫草多糖溶液,立即加入40μl的3mmol/L的邻苯三酚,振荡使之充分反应,4min后,用10μl的3mol/L的HCl终止反应,在325nm处测定吸光度(A1

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