waters高效液相色谱

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1、Waters高效液相色谱操作说明一．简介本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze图谱处理软件）+流动相二．操作流程0.准备工作确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误1.开机打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。待程序完全启动，整个开

2、机过程结束。系统默认进入上次使用的方案。2.建立新方法和新方案2.1新建方案方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。2.1.1创建步骤选择→单击→单击"next"→在"projectname"中输入方案名称（如abc），"comments"中可填注释，也可不填。→单击"finish"2.1.2打开创建的方案在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案（如abc）→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了2.2新建方法在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。试验方法主要设定的包括洗脱方

3、式，检测波长等参数。2.2.1新建方法步骤单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmedflow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel1选项卡）→在"wavelength"框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc1）→单击"save"32.2.2洗脱方式的设定（重要）在programmedflow中可看到。其中Isocratic为等度洗脱，Gradient为梯度洗脱。以下我们来分述。2.2.2.1若你用等度时（

4、Isocratic）："pumpmode"中选择"Isocratic"表格中"IsocraticFlowA"为流动相A的流速,"IsocraticFlowB"为流动相B的流速，"TotalFlow"为总流速。例如：假设方法要求用乙腈做A相，用纯水做B相，乙腈占70%，水占30%，等度，则：2.2.2.2若你用梯度时（Gradient）："pumpmode"中选择"Gradient"表格中第1行默认已有，单击下面空白行处添加新行。"Time"为时间，即此行开始时间；"Flow"不作更改，保持1ml/min的总流速；%A处填A相比

5、例；%B处填B相比例；curve处为曲线型号，一般不变。例如：假设用方法要求乙腈做A相，用纯水做B相，0—10min乙腈从100%到50%；10—30min乙腈从50%到40%；30—60min乙腈从40%到80%；则：洗脱设置完毕继续按照2.2.1完成方案的创建。3.洗泵和平衡方法设定完毕，我们还要进行洗泵与平衡两项工作，让机器做好进样前的准备。3.1洗泵在更换流动相，第一次使用机器，长时间未使用的情况下需要进行洗泵的工作。步骤如下：单击（purgepump）→"next"→按指示图操作：打开泵面板，取塑料注射器，扭开排液阀

6、旋钮，用注射器抽取泵中液体10ml左右（无气泡即可），反向扭紧旋钮，取出注射器。根据需要灌洗AB泵。单击"next"→按图示操作：向左打开参比阀，单击"next"→（即是对AB泵以默认的5mi/min的流速进行冲洗，若只充一个泵，只选一个即可。）默认冲洗时间5min，5min后自动停止，向右关紧参比阀→"finish"结束洗泵3.2平衡洗完泵后，还要将色谱柱内杂质洗净。所以我们需要进行平衡。在每次进样前，我们都必须洗平衡。步骤如下：单击(equilibrate)→在弹出的对话框选择所需方法（一般为你的实验方法，如abc1）→待

7、基线稳定，且达到小数点后5位数字4的时候，即可停止洗平衡（一般十几钟到几十分钟不等）→(abort)4.进样平衡好之后，即可进样（请先将注射器中样品准备好5）进样步骤如下：单击(singleinjetion)→在出现的对话框中输入进样名称，方法，进样体积（一般为10ul），时间等内容，例如设置好之后→单击"inject"按钮→等到操作动画出现时，将进样环手柄搬到load位置，平稳插入微量注射器，均匀恒速注入样品液，除另有规定外，不应立即取下注射器，手柄搬到inject位置，即开始出现图像→点击(senddatetoreview

8、)出现大视图→等到样品跑结束，自动出现结果图。（中途可以按中止(abort)停止进样5.数据处理得出了色谱图，下一步就是对色谱图各峰的统计，并得出最终结果。5.1统计各峰时间，面积，高度等内容。步骤如下：单击→接着单击（channels选项卡）找到你需要处理的内容双击打开6→