医学免疫学课程综合性

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1、《医学免疫学》课程综合性、设计性实验开设计划（免疫学教研室）本教研室在顺利完成我学院下达的本科教学任务的同时，也在不断探索进行教学改革，通过使用新的教学手段、教学方法及加强课件的建设，使学生能更好地掌握本学科的专业知识。我教研室为增加实验课中学生动手操作的内容，培养学生动手操作能力，同时在实验课教学中鼓励和培养学生的创造性思维的能力，拟计划对2004级临床医学、预防医学、检验、生物技术、儿科学、法医学、影像学、妇幼卫生、耳鼻喉学、护理学、麻醉学、心理学、肿瘤学、急救医学、口腔学、神经精神等本科各专业

2、学生中开展综合性、设计性实验，现将实验方案安排如下：实验设计方案：一、中华猕猴桃多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响（一）研究目的中华猕猴桃多糖（ACPS）是从中药材中华猕猴桃根中提取的多糖复合物[1]，本研究以巨噬细胞为例，观察ACPS对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响，探讨ACPS的免疫药理作用。（二）技术路线链球菌酵母菌腹腔注射ACPS实验组（腹腔给药，共12天）腹腔Mφ小鼠第13天腹腔注射涂片镜检，计算吞噬百分率收集腹腔巨噬细胞生理盐水对照组（三）实验方法1．用适量链球菌等量注射小鼠腹腔[2]，即达到

3、感染效果，又不致小鼠在15天内死亡。将小鼠随机分为试验组和对照组，每组10只。2．试验组的小鼠31.0mg/kg每日腹腔给药（ACPS），共12天。末次给药后24小时，每只小鼠腹腔注射0.5ml酵母菌（1×105菌/ml）。30min后，腹腔注射，RPMI—1640培养液（PH7.0）2ml，收集腹腔液，滴于盖玻片上，移至37℃培养箱30分钟，染色后油镜观察涂片，计算吞噬百分率。3．对照组以生理盐水代替ACPS，其它步骤同实验组。二、黄芪对人外周血T细胞增殖及NK活性的影响（一）研究目的通过观察黄芪

4、（Astragalusmembranaceus；AM）对PHA诱导的体外T细胞增殖和对NK细胞杀伤活性的影响，探讨AM是否对机体免疫有促进作用。制备AM（二）技术路线分离外周血PBMCPHA刺激外周血NK活性测定（51Cr释放法测每样本cpm值）PHA+AM实验组PHA+1640培养液对照组检测T细胞增殖反应的影响（3H—TdR掺入法测每样本cpm值）（三）实验方法1.AM的制备[3]用黄芪饮片制成煎液2.AM对T细胞增殖反应的影响：采用（采用3H—TdR掺入法[2]）：随机抽取正常献血员静脉血抗凝

5、常规法分离PBMC，以RPMI—1640培养液调浓度至1×106/ml，加入96孔培养板中100ml/孔，加入AM（最适浓度为25mg/ml）和植物凝聚素(PHA，最适浓度为25mg/ml)，设计如下两组，每组均重复三孔。（1）PBMC+PHA（100ml）+1640培养液（100ml）（对照组）（2）PBMC+PHA（100ml）+AM（100ml）（实验组）37℃、5%CO2孵育56h后，每孔加3H—TdR20ul。继续培养16h，测每样本cpm值，计算促进率3.AM对NK活性的影响应（用51C

6、r释放法[2]）：效应细胞来自献血员新鲜血液常规分离的淋巴细胞，提前用AM浓度5mg/ml，处理16h，用RPMI1640培养液调细胞浓度至1×106/ml备用。靶细胞（K562）用51Cr标记，并温育45min后调细胞浓度1×105/ml备用。设计以下两组：（1）未经AM处理的效应细胞lml+靶细胞悬液0.1ml（对照组）（2）AM处理过的效应细胞lml+靶细胞悬液0.1ml（实验组）置37℃、5%CO2条件下培养4h后离心2500r/min，10min后，取上清液0.5ml。将上清液置r计数器中

7、测定其放射性（cpm值）三、灵芝多糖对小鼠免疫调节的研究（一）研究目的灵芝多糖（GLP）是一种从灵芝菌培养物的菌丝中提取的多糖，通过检测注入不同计量GLP后小鼠的淋巴细胞增殖反应及诱生IL—2的情况来说明不同剂量的GLP对免疫功能的不同影响。实验对象（小鼠）（二）技术路线动物分组正常对照组实验组（4个GLP浓度组）腹腔注射不同剂量的GLP腹腔注射生理盐水取脾细胞体外检测IL—2活性测定(3H—TdR法)淋巴细胞增殖反应(3H—TdR法)（三）实验方法1．小鼠处理：随机分组，将实验组及对照组小鼠按相同

8、方法饲养，4个实验组小鼠腹腔内注射不同剂量的GLP（4mg/只2mg/只，0.1mg/只.0.05mg/只）连续5天，每天一次，未注射GLP的小鼠作对照组。第六天将老鼠处死，消毒皮毛，取脾脏制备脾细胞悬液。2．淋巴细胞增殖反应：（1）用RPMI—1640培养液调脾细胞浓度至2.5×106/ml。（2）取96孔培养板每孔加脾Cells悬液100ml/孔，每份样本加3个孔；（3）再加有丝分裂原至终浓度5ug/ml于37℃5%CO2单培养箱中培养66h；（4）加入3H—Td