snt1675-2011 真鲷虹彩病毒检疫规范

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１６７５—２０１１代替ＳＮ／Ｔ１６７５—２００５真鲷虹彩病毒病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉狉犲犱狊犲犪犫狉犲犪犿犻狉犻犱狅狏犻狉狌狊犱犻狊犲犪狊犲（犚犛犐犞犇）２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准真鲷虹彩病毒病检疫技术规范ＳＮ／Ｔ１６７５—２０１１中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：

2、１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张１字数２５千字２０１１年１１月第一版２０１１年１１月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２２６３９定价１８．００元标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１６７５—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１６７５—２００５《鱼真鲷虹彩病毒聚合酶链反应操作规程》。本标准与ＳＮ／Ｔ１

3、６７５—２００５相比，主要技术差异如下：———增加现场诊断；———增加间接荧光抗体试验；———增加病毒的细胞分离；———对原标准中聚合酶链式反应（ＰＣＲ）进行修改。本标准修改采用了ＯＩＥ《水生动物疾病诊断手册》（２００９版）第２．３．７章。本标准与ＯＩＥ《水生动物疾病诊断手册》（２００９版，第２．３．７章）相比，主要差别如下：———删除了ＯＩＥ手册中真鲷虹彩病毒病防控和流行病学内容；———重新编排了格式。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国深

4、圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：吴文忠、兰文升、刘荭、吴海峰、方成俊、张伯强、郑腾。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１６７５—２０１１真鲷虹彩病毒病检疫技术规范１范围本标准规定了真鲷虹彩病毒病（ｒｅｄｓｅａｂｒｅａｍｉｒｉｄｏｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ，ＲＳＩＶＤ）的临床和实验室检测标准方法。本标准适用于水生动物真鲷虹彩病毒病的检测和诊断。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件

5、，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ１８０８８出入境动物检疫采样。３概述真鲷虹彩病毒病（ＲＳＩＶＤ）是养殖海水鱼类的一种重要疾病，被列入世界动物卫生组织（ＯＩＥ）水生动物疫病名录，是水生动物及其产品的国际贸易中，所监测的鱼类重要疾病之一（参见附录Ａ）。对ＲＳＩＶ的监测、检测和诊断方法见附录Ｂ。４缩略语下列缩略语适用于本文件。ＣＰＥ（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ）：细胞病变ＩＦＡＴ（ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｓｔｓ）：免疫荧光抗体试验ＩＳＫＮＶ（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｓｐ

6、ｌｅｅｎａｎｄｋｉｄｎｅｙｎｅｃｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）：传染性脾肾坏死病毒ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）：聚合酶链式反应ＲＳＩＶＤ（ｒｅｄｓｅａｂｒｅａｍｉｒｉｄｏｖｉｒａｌｄｉｓｅａｓｅ）：真鲷虹彩病毒病ＲＳＩＶ（ｒｅｄｓｅａｂｒｅａｍｉｒｉｄｏｖｉｒａｌｖｉｒｕｓ）：真鲷虹彩病毒５主要仪器和设备５．１普通倒置显微镜。５．２荧光显微镜。５．３电子显微镜。５．４热循环扩增仪（ＰＣＲ仪）。５．５恒温培养箱。５．６离心机。５．７凝胶成像仪。５．８ＤＮＡ电泳系统。１标准分享网www.bzfxw.c

7、om免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１６７５—２０１１６主要试剂和材料６．１ＧＦ（Ｇｒｕｎｔｆｉｎ）细胞系：由国家质量监督检验检疫总局指定单位提供。６．２Ｌ１５培养基（含Ｅａｇｌｅ’ｓ平衡盐溶液）。６．３小牛血清（ＦＢＳ）。６．４标记了异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）的抗小鼠的抗抗体。６．５抗ＲＳＩＶ的单克隆抗体：由国家质量监督检验检疫总局指定单位提供。６．６ＰＣＲ有关试剂。６．７ＲＳＩＶ：由国家质量监督检验检疫总局指定单位提供。６．８引物：引物１：１Ｆ：５’ＣＴＣＡＡＡＣＡＣＴＣＴＧＧＣＴＣＡＴＣ３’

8、引物２：１Ｒ：５’ＧＣＡＣＣＡＡＣＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＴＣ３’引物１和引物２可扩增ＲＳＩＶ和ＩＳＫＮＶ中５７０ｂｐ的基因片段。引物３：４Ｆ：５’ＣＧＧＧＧＧＣＡＡＴＧＡＣＧＡＣＴＡＣＡ３’引物４：４Ｒ：５’ＣＣＧＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＴＴＣＴＧＧＡ３’引物３和引物４只扩增ＲＳＩＶ５６８ｂｐ的基因片段。７抽样出境检疫抽样应在原产养