真鲷虹彩病毒lamp检测方法的建立

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1、2018年第35卷第1期真鲷虹彩病毒LAMP检测方法的建立袁向芬，石素婷，吕继洲，吴绍强（中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所，北京　100176）摘　要：为建立一种检测真鲷虹彩病毒的环介导等温扩增（LAMP）方法，满足口岸、养殖场对该病的快速监测的需求，本研究比对分析了GenBank中公布的真鲷虹彩病毒基因组序列，筛选其主要衣壳蛋白MCP基因保守区序列，进行LAMP引物设计，建立了真鲷虹彩病毒LAMP检测方法。对扩增条件进行优化，确定最佳反应条件为62℃，45min。灵敏度试验结果显示，该方法最低检测限为1

2、00拷贝/μL目的基因。特异性试验结果显示，该方法不与流行性造血器官坏死病毒（EHNV）、蛙病毒3型（FV3）、甲鱼虹彩病毒（STIV）发生交叉反应。结果表明，本研究建立的LAMP方法具有良好的敏感性和特异性。对5份疑似真鲷虹彩病毒感染的临床样品进行检测，发现检测结果与世界动物卫生组织（OIE）推荐的PCR方法检测结果符合率为100%。研究表明，本方法具有灵敏度高、特异性强，以及仪器设备简单、操作便捷、结果直观等优点，非常适合作为初筛手段，应用于养殖场、口岸等一线的疫病监测。关键词：水生动物疫病；真鲷虹彩病毒

3、；环介导等温扩增；快速检测中图分类号：S852.65　　文献标识码：A　　文章编号：1005-944X（2018）01-0095-05DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2018.01.026EstablishmentofLAMPforDetectionofRedSeaBreamIridovirusYuanXiangfen，ShiSuting，LüJizhou，WuShaoqiang（InstituteofAnimalQuarantine，ChineseAcademyofInspecti

4、onandQuarantine，Beijing100176，China）Abstract：TodevelopaLoop-mediatedisothermalamplification（LAMP）methodofRedseabreamiridovirus（RSIV）forrapidmonitoringofthediseaseatportofentryandfishery，theRSIVgenomesequencepublishedinGenBankwascomparedandanalyzed.Theconserva

5、tiveregionsequenceofthemaincapsidproteinMCPgenewasscreenedout，theLAMPprimersweredesigned，andLAMPfordetectionofRSIVwasestablished.Theconditionsofamplificationwereoptimized，andthebestreactionconditionwas62℃，45min.Sensitivitytestresultsshowedthattheminimumdetec

6、tionlimitforthismethodwas100copies/µL.SpecifictestresultsshowedthatthismethoddidnotcrossreactionwithEHNV，FV3andSTIV，withgoodsensitivityandspecificity.Bydetectionof5clinicalsamples，resultsshowedthatthecoincidencerateofthetestresultswiththatofthePCRmethodrecomm

7、endedbyOIEwas100%.Thismethodwasarapid，simple，specificandsensitiveassaywithsimpleinstrumentsandvisualizationresults，whichwassuitableforbeingusedasascreeningmethodformonitoringdiseasesatportsandfishfarms.Keywords：aquaticanimaldiseases；Redseabreamiridovirus；Loop

8、-mediatedisothermalamplification（LAMP）；rapiddetection真鲷虹彩病毒（Redseabreamiridovirus，年首次在日本四国岛的人工养殖患病真鲷中被发RSIV）属于虹彩病毒科（Iridoviridae）、细胞肿现[3]，主要感染真鲷、花鲈、条石鲷等30余种海[1-2]大病毒属（Megalocytivirus）。该病毒于1990[4-5]水鱼类。患