专题二 微生物的培养与应用

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1、专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、培养基1.概念：人们按照对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2.种类（1）按物理状态来分：·固体培养基：不加凝固剂，用于工业生产。·液体培养基：加凝固剂（如琼脂），用于微生物分离、鉴定，活菌数，保藏菌种等。（琼脂是一种从红藻中提取出的多糖，在98°C以上熔化，44°C以下凝固，在常规培养条件下呈固态。琼脂中的多糖不易被微生物分解，所以一般不用做碳源。）（2）按功能来分：·选择培养基：培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长

2、，促进所需要的微生物生长。用于培养、分离出特定的微生物。常见选择培养基如下：加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞·鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。用于鉴别不同种类的微生物。（可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌。若有，菌落呈深紫色并带有金属光泽。）（3）按成分来分：·天然培养基·合成培养基3.培养基的营养要素不管哪种培养基，一般都

3、含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。例如，乳酸杆菌需添加维生素，霉菌时需将pH调至酸性，细菌pH调至中性或微碱性，厌氧微生物需无氧条件。（1）碳源：构成生物细胞、生物体及细胞代谢产物，有些为异养生物提供能量。主要来源与CO2、NaHCO3等无机化合物和糖类、脂质、花生粉饼、石油等有机化合物。（1）氮源：用于合成蛋白质核酸及含氮代谢产物，也可为异氧微生物提供能源。主要来源于N2、NH3、铵盐

4、、硝酸盐等无机化合物和尿素、牛肉膏、蛋白胨等有机化合物（2）生长因子：可作为酶与核酸等的组成成分，主要有维生素、氨基酸、碱基等。（3）水分：良好的溶剂、细胞生活及生化反应的介质、参与物质运输及参与生化反应的反应物。（4）无机盐：细胞组成成分，生命调节物质，自养菌的能源或其他营养来源，酶的激活剂。二、无菌技术1、概念：防止一切外来杂菌侵入并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法。2、核心：防止杂菌污染，保证培养物的纯度。3、无菌技术具体操作①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微

5、生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。4、消毒与灭菌·消毒：指使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。常见的消毒方法如下：（1）煮沸消毒法:100℃开水煮沸5-6min。适用于耐高温的液体或物品。（2）巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。适用于牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体。能杀死液体中的微生物但不破坏营养成分。（3）化学药剂消毒法:用70%-75%酒精、碘酒涂抹；新洁尔（来苏尔）等喷洒;氯气消毒水源

6、。适用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒，空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等的消毒。（4）紫外线消毒法：30W的紫外灯照射30min适用于接种室空气消毒。·灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。（1）灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧。适用于微生物接种工具如接种环、接种针或其他金属用具等，接种过程中试管口或瓶口等容易被污染的部位。灭菌迅速彻底。（2）干热灭菌：干热灭菌箱160-170℃下加热1-2h。适用于玻璃器皿、金属用具等耐高温的物品。（3）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅100kPa、121℃下维持15-30min。培养基及多种器材、物品。使用时

7、，将灭菌物品放置在成有适量水的高压蒸汽灭菌锅中，把锅内的水加热煮沸，冷空气彻底排除后，将锅密闭，继续加热是气压上升。三、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基培养基组成提供的重要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨10g氮源和维生素NaCl5g无机盐H2O定容至1000mL氢元素、氧元素琼脂15-20g凝固剂表中各成分含量确定的原则：所培养的微生物对个营养成分的需求量。培养基配置好后分装前应调pH值。在培养基凝固前要搁置斜面。1、制备流程：计算→称量→熔化→灭菌→倒平板2、注意：（1）在称量纸上称量。（2）熔化过程中，不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂（3）将

8、培养基转移到锥形瓶中，使